?【產品名稱】

中文名稱：人NK細胞高效擴增試劑盒

英文名稱：Human NK cell robust expansion kit

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【編號】

CT-001

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【包裝規格】

2L/套

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【試劑盒組成】

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【預期用途】

適用于從人單個核細胞（MNC）在體外高效擴增成NK細胞。

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【貯藏條件與有效期】

NK-I，NK-III，NK-IV，IL-2置于2-8°C保存，有效期為12個月；NK-II置于-20°C保存，

有效期為24個月，置于2-8°C時，有效期則為3個月，并勿反復凍融；

生產日期，有效期至：見標簽。

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【產品簡介】

NK細胞是人體免疫的第一道防線，具有非限制性殺傷的特點，如何發揮NK細胞的免疫作用從而治療腫瘤等疾病是一個重要的課題。因為NK細胞僅占外周血的5-10%，細胞數量的稀少往往是制約研究的一個重要原因。本產品用于從單個核細胞（MNC）在體外高效擴增成NK細胞，具有擴增效率高，目的細胞百分比高的特點，起始單個核細胞經過14天培養，總細胞數可以擴增約50倍左右，NK細胞數可以擴增500倍以上，且純度可達70%-85%（由于個體差異，有的樣品誘導后NK細胞純度低于70%或高于85%）。

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【操作步驟】

1. D0?將制備好的單個核細胞（MNC）按1M cells/mL 細胞密度鋪于T-75瓶中，加入NK-IV

培養基45mL，NK-I 125μL ，NK-II 5mL ，NK-III 250mg（500mg/支用1mL?NK-IV培養基

溶解，可用于2套NK細胞高效擴增試劑盒）以及 IL-2 50μL（即IL-2終濃度為1000IU/mL）；

注意：

1）IL-2 使用1mL NK-IV培養基溶解后（IL-2溶解后濃度為1000IU/mL），可存于2-8°C冰箱，存放時間不超過兩周。建議將IL-2溶解后分裝于無菌試劑管后保存于-20°C冰箱，使用時溶解即可，注意不要反復凍融，且不可使用長期置于2-8°C的IL-2，否則將嚴重影響本試劑盒的擴增效果；

2）請勿將NK-II 從-20°C冰箱中取出后直接置于37°C中；

3）NK-II溶解完全后，輕輕搖晃瓶身，使其溫度與成份均一，搖晃時，請小心避免氣泡產生；

4）解凍時，若有蛋白沉淀產生屬于正?，F象，若該沉淀影響觀測，可通過離心或0.22um濾器過濾去除；

5）在細胞鋪加后與D4補液之前的這段時間內，盡可能不要移動培養瓶，以免使其受到溫度變動，震蕩等物理因素的干擾。

2.D4?補加90ml NK-IV培養基，NK-II 10mL，IL-2 100μL（即IL-2終濃度為1000IU/mL），轉入細胞培養袋，此時袋子含150mL培養基；

注意：

1）為使更多的細胞轉入到培養袋中，可先將T-75瓶中的細胞吹打均勻，全部轉入培養袋中，再用部分新鮮配制的培養液潤洗培養瓶，并再次轉入培養袋中，最后補齊培養液即可；

2）在此次補液以及后續的補液操作中，盡可能先將NK-IV培養基預先37°C溫浴，從而使細胞的培養溫度在較小的范圍內波動。

3.D6?往培養袋補加135mL NK-IV培養基，NK-II 15mL，IL-2?150μL（即IL-2終濃度為1000IU/mL），此時袋子含300mL培養液；

4.D8?往培養袋補加270mL NK-IV培養基，NK-II 30mL，IL-2?300μL（即IL-2終濃度為1000IU/mL），分成兩袋，每個袋子含300mL培養液；

5.D10?分別往每個培養袋補加280mL NK-IV培養基，NK-II 20mL，IL-2?300μL（即IL-2終濃度為1000IU/mL），此時每個袋子含600mL培養液；

6.D12?分別往每個培養袋補加400mL NK-IV培養基，IL-2?400μL（即IL-2終濃度為1000IU/mL）此時每個袋子含1000mL培養液；

7.D14天收獲NK細胞。

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【注意事項】

1.?在使用本試劑盒時，可先將NK-I試劑管低速離心（如1