物基因型快速鑒定試劑盒，即Rapid Plant Genotyping Assay Kit植物樣品直接PCR預混液(2X)，提供了一種使用特別便捷的all-in-one的2倍濃度的檢測試劑，加入一小塊植物葉片等柔嫩的組織和適量的引物和水，就可以直接進行PCR擴增，后續直接電泳觀察結果就可以判斷植物的基因型了。本產品不僅可以用于植物的基因型鑒定，也可以用于其它適當用途的植物樣品的直接PCR檢測，可以輕松完成長度達到5kb的DN**段的擴增。

本試劑盒提供了可專門用于植物樣品的2倍濃度的PCR預混液，并且PCR結束后可以直接上樣電泳無需添加上樣緩沖液。本產品含有耐葉綠素的PlantTaq? DNA聚合酶，這是一種經過基因工程改造的非常高效的適用于植物樣品直接PCR檢測的耐熱DNA聚合酶。

對于植物葉片等柔嫩樣品可以直接PCR檢測，無須提取DNA。本產品對玉米、絲瓜、甜椒、豆角、黃豆、辣椒、黃瓜、茄子、番茄等植物樣品中的葉綠素、多糖、多酚等各種PCR抑制劑表現出超強的抗性，對于新鮮采集的、4℃保存或低溫凍存的這些植物的葉片、嫩種子等，都無需進行DNA提取純化，可以直接用于PCR擴增目的DNA。

所需樣品少，耐受能力高。本產品用于20μl的PCR擴增體系時，通常僅加入0.1-1mm直徑葉片即可順利完成PCR檢測。

本產品提供了一對陽性對照引物，便于確認PCR檢測效果。該對引物是多種植物的通用引物，可以擴增多數植物葉綠體中高度保守的IRB18基因的297bp DN**段。

本產品用于植物葉片檢測的效果參考圖1。圖中可見，本產品對多種常見植物葉片都有很好的PCR擴增效果。

圖1. 植物基因型快速鑒定試劑盒檢測圖中所示不同植物葉片中目的基因的實測效果圖。使用植物基因型快速鑒定試劑盒中提供的Easy-Load? Plant Direct PCR Master Mix (2X)和Control primer mix，在PCR體系中直接加入不同植物葉片，用于擴增IRB18基因的297bp DN**段后的電泳效果圖。M, DNA marker ；1, 豆角(Cowpea)；2, 黃豆(Soybean)；3, 絲瓜(Sponge gourd)；4, 甜椒(Capsicum)；5, 玉米(Maize)；6, 黃瓜(Cucumber)；7, 辣椒(Pepper)；8, 茄子(Eggplant)；9, 番茄(Tomato)。

本產品擴增不同長度目的基因的效果參考圖2。圖中可見，本產品以番茄葉為模板可直接PCR擴增出長達5kb的DN**段。

圖2. 植物基因型快速鑒定試劑盒直接以番茄葉片為模板擴增不同長度的目的基因的效果圖。M, DNA marker; 1, IRB18(297bp)；2, actin(693bp)；3, rbcL(1201bp)；4, rpoC2(2069bp)；5, rpoC2(3079bp)；6, rpoC2(3942bp)；7, rpoC2(5000bp)。

本產品擴增獲得的PCR產物帶有3'-dA overhangs的粘性末端，可直接用于和T載體連接進行TA克隆。

用途：植物葉片等比較柔嫩的組織樣品基因組DNA中目的基因的直接擴增、基因分型(如基因缺失等)，以及基因敲除或轉基因植物基因型分析。

失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Easy-Load? Plant Direct PCR Master Mix (2X)中含有的PlantTaq? DNA Polymerase失活。

本產品如果用于50微升的PCR反應體系，兩種包裝的本產品分別足夠用于40個和200個反應；如果用于20微升的PCR反應體系，兩種包裝的本產品分別足夠用于100個和500個反應。

-20℃保存。適當避免反復凍融。

由于PCR反應非常靈敏，在使用本產品時請注意避免微量待擴增DNA的污染，并盡量考慮設置不加模板的空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。

設置PCR反應體系時，20μl和50μl PCR體系中植物樣品的推薦用量分別為0.1-1mm和0.3-3mm直徑葉片或類似大小其它比較柔嫩的植物組織，可以直接添加到PCR體系中，無需進行任何額外處理。經測試本產品適用于柔嫩新鮮種子的直接PCR，但不適用于干硬種子的直接PCR。

PCR反應結束之后，酌情3000-5000g離心3-5min以沉淀植物組織碎片，便于吸取上清用于電泳分析等。

需自備Nuclease-Free Water。

本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。