微量DNA產物純化試劑盒說明書
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MicroDNA?Purification?Kit
??目錄號：??YJ0520
?保???存：??室溫
?組分說明????????????????????????????????????????
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????????????????????????????????????????Cat.No.??????????????????YJ0520
????????????????????????????????????????KitSize?????????????????????50
???????????????????????????????????????BufferPB???????????????????30ml
???????????????????????????????????????BufferPS???????????????????15ml
??????????????????????????????BufferPW（concentrate）???????????????10ml
???????????????????????????????????????BufferEB???????????????????10ml
???????????????????????????????????SpinColumnDS????????????????????50
???????????????????????????????CollectionTube（2ml）?????????????????50
?產品簡介
?????本試劑盒是專門針對微量PCR產物及一些酶反應液（酶切，連接，探針標記等）而設計的，利用硅基質膜技術，以非常小的終洗脫體積（可少至10μl）,從反應液中快速純化50bp-50kb的DNA片段，純化過程中可去除引物、寡核苷酸、酶等雜質，可獲得高純度，高濃度，完整性好的DNA，回收率高達90%。本試劑盒回收的DNA可直接用于測序、連接和轉化、標記、體外轉錄等分子生物學實驗。
?注意事項
?1.???本試劑盒適用于無選擇性地回收溶液中所有的DNA片段，如需選擇性回收特定片段，同時去除其他不同大小片段，請選擇我公司的膠回收試劑盒（YJ0524，YJ2302，YJ0518或YJ0526）。
?2.???第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明先在?BufferPW?中加入無水乙醇。
?3.???使用前請檢查?BufferPB?是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀現象，可在?37℃水浴幾分鐘，即可恢復澄清。
?4.???回收率與初始DNA量和洗脫體積有關。
?5.???所有離心步驟均為使用常規臺式離心機室溫下進行離心。
?自備：無水乙醇，離心管??
操作步驟
1.????估計PCR反應液或酶切反應液的體積，加入5倍體積的Buffer?PB，充分混勻（如PCR反應體系為50μl，則加入250μlBufferPB，無需去除石蠟油或礦物油）。
??????注意：在加入BufferPB后檢測溶液的pH值，若pH值大于7.5，可向其中加入10-30?μl?的3M醋酸鈉（pH5.0），從而將pH值調到5-7。
2.????柱平衡：向已裝入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDS）中加入200?μl?Buffer?PS，12,000rpm（~13,400×g）離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
3.????將步驟1中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
??????注意：吸附柱容積為700μl，若樣品體積大于700μl可分批加入。
4.????向吸附柱中加入650?μl?Buffer?PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
??????注意：如果純化的DNA是用于鹽敏感的實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議加入BufferPW后靜置2-5分鐘再離心。
5.????12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，以徹底晾干。
??????注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應（酶切、PCR等）。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。
6.???將吸附柱置于一個新離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加10-30?μl?Buffer?EB，室溫放置2分鐘。12,000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
??????注意：1）洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5范圍內（可以用NaOH將水的pH值調到此范圍）。?
????????????2）為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回吸附柱中，重復步驟6。
????????????3）洗脫體積不應小于10μl，體積過少影響回收效率。
????????????4）如果使用TE洗脫，需要考慮其中含有的EDTA是否會影響后續的酶促反應。
????????????5）回收大于10kb的DNA片段時，BufferEB應在50℃水浴中預熱，適當延長吸附和洗脫時間，可增加回收效率。
上海研謹生物公司對外承接RT-PCR技術服務、細胞培養技術服務、原位雜交技術服務、免疫沉淀技術服務、Western?Blotting技術服務、動物模型構建服務、SCI論文服務、PCR實驗服務，并為廣大科研用戶提供各種高品質的試劑和服務，如細胞、血清、Elisa試劑盒、質粒提取試劑盒、DNA產物純化試劑盒、病毒RNA提取試劑盒、PCR等產品，針對以上各項服務，我們均有具有豐富服務經驗和深厚專業背景的人員團隊為您提供技術服務和支持。?
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