?人 IL-10(高靈敏) Elisa Kit
| 中文名稱 | 人白細胞介素10 （高靈敏）Elisa試劑盒 |
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| 英文名稱 | Human IL-10(High Sensitivity) Elisa Kit |
| 反應性 | Human |
| 樣品類型 | 血清/血漿/細胞培養上清 |
| 檢測范圍 | 0.625 - 40 pg/ml |
| 靈敏度 | 0.3 pg/ml |
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Human IL-10(High Sensitivity) Elisa Kit
品牌：Solarbio | 貨號：SEKH-0018(HS)
| 商品貨號： | 商品品牌： | 規格 | 基本售價： | 選擇規格 |
|---|---|---|---|---|
| SEKH-0018(HS)-96T | Solarbio | 96T | 3800.00元 |
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背景介紹：
白介素10是一種多細胞源、多功能的細胞因子,調節細胞的生長與分化,參與炎性反應和免疫反應,是目前公認的炎癥與免疫抑制因子。在腫瘤、感染、器官移植、造血系統及心血管系統中發揮重要作用,與血液、消化、尤其是心血管系統疾病密切相關。在1989年，Mosmannand及他們的同事描述了一種新的免疫介質，由Th2細胞克隆分泌，能夠抑制Th1細胞克隆IL-2和IFN-γ的合成。早期被命名為細胞因子合成抑制因子(CSIF)，這種因子后來被命名為IL-10，在這被發現的21年期間，很多研究深入剖析了這個細胞因子的生物學特性，人類IL-10基因位于1號染色體上，包括總共5.1kb的序列包含5個外顯子，IL-10基因的啟動子中有很多的SNP位點，一些證據表明這些基因多態性在體外會影響IL-10的表達，IL-10基因由178個氨基酸組成蛋白質，分泌時會被切去18個氨基酸的信號肽，人類和鼠類的IL-10約有75%的氨基酸序列是一致的。
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檢測原理：
Solarbio (Solarbio ?)?ELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯免疫吸附檢測技術。將抗人IL-10單克隆抗體包被在酶標板上；分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本，標準品和樣本中的人IL-10會與酶標板上的包被抗體充分結合；洗板后加入生物素化抗人IL-10抗體，該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標準品和樣本中的人IL-10發生特異性結合；洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會發生高強度的非共價結合；洗板后加入顯色劑底物TMB，若反應孔中樣品存在不同濃度的人IL-10，則HRP會使無色TMB變成不同深淺（正相關）的藍色物質，加入終止液后反應孔會變成黃色；最后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定反應孔樣品吸光度（OD），樣本中的人IL-10濃度與OD成正比，通過繪制標準曲線和四參數擬合軟件便可計算出樣本中人IL-10的濃度。
原理圖：
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注意事項：
1.?試劑盒應在有效期內使用，請不要使用過期的試劑。
2.?試劑盒未使用時應保存在2-8℃冰箱，已復溶但未用完的標準品，請丟棄。
3.?試劑盒使用前請在室溫恢復30min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4.?在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測，且加入試劑的順序應保持一致。
5.?為避免交叉污染，請在試驗中使用1次性試管，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器。.
6.?濃縮生物素化抗體和濃縮酶結合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，
使用前請離心處理（5-10 S即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7.?除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內含的
??試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8.?為保證結果準確，每次檢測均需做標準曲線。
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安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時，請按國家生物實驗室安全防護有關管理規定執行。
試劑盒組成及儲存：
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試劑盒組成 |
規格（96T） |
規格（48T） |
保存條件 |
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抗體預包被酶標板 ? |
8*12 |
8*6 |
2-8℃ |
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標準品 |
2支 |
1支 |
-20?℃ |
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SR1標準品/樣本稀釋液 |
16ml/瓶 |
8?ml/瓶 |
2-8℃ |
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60ul(100X) |
2-8℃ |
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SR2生物素化抗體稀釋液 |
16ml/瓶 |
8?ml/瓶 |
2-8℃ |
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濃縮酶結合物（避光） |
120ul(100X) |
60ul(100X) |
2-8℃ |
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SR3酶結合物稀釋液 |
16ml/瓶 |
8?ml/瓶 |
2-8℃ |
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濃縮洗滌液 （20×） |
30ml/瓶 |
15?ml/瓶 |
2-8℃ |
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顯色底物（避光） |
12ml/瓶 |
6?ml/瓶 |
2-8℃ |
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終止液 |
12ml/瓶 |
6?ml/瓶 |
2-8℃ |
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封板膠紙 |
4張 |
2張 |
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說明書 |
1份 |
1份 |
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自備實驗器材（不提供，可代購）
1．?酶標儀（主波長450nm，參考波長630nm）
2．?高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3．?洗板機或洗瓶
4．?37℃孵育箱
5．?雙蒸水，去離子水，量筒等
6．?稀釋用聚丙烯試管
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樣本收集及儲存：
1.?細胞培養上清：
將細胞培養基移至無菌離心管，在4℃條件下1000?×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時內檢測可放入2-8℃儲存），避免反復凍融。
2.?血清樣本：
室溫血液自然凝固20 min后，在4℃條件下1000×g離心10 min，然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時內檢測可放入2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請再次離心，避免反復凍融。
3.?血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據標本的實際要求選擇EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合20 min，在4℃條件下1000×g離心10 min，然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時內檢測可放入2-8℃儲存），避免反復凍融。
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※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結果；如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的最高值，請將樣品做適當倍數稀釋后檢測，建議正式實驗前做預實驗以確定稀釋倍數。
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試劑準備：
1.?試劑回溫：首先在實驗前30 min將試劑盒，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現結晶，請放入37℃?溫浴直到結晶全部溶解。
2.?配制洗滌液：預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將20倍濃縮洗滌液稀釋成1倍應用液，未用完的濃縮洗滌液放入4℃冰箱保存。
3.?標準品梯度稀釋：加入標準品/樣本稀釋液（SR1）1ml至凍干標準品中，靜置15分鐘待其完全溶解后輕輕混勻(濃度為2000pg/ml)，然后按照以下濃度：40(20ul復溶好的標準品原液+980ul標準品稀釋液）、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0pg/ml進行稀釋，40pg/ml為標準曲線最高點濃度，標準品/樣本稀釋液（SR1）作為標準曲線的零點（0pg/ml）。復溶過的標準品原液（2000pg/ml）未用完的應廢棄或根據需要按照一次用量分裝，并