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?????????????????????????????????????DNA轉染試劑說明書
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DNAFect?Transfection?Reagent
目錄號：YJ0860
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組分說明
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????????????????????????????????????KitSize?????????????????0.5?ml????????????1?ml
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產品簡介
DNAFect是一種高效的陽離子脂質體轉染試劑，適用于多種細胞的DNA轉染。對于大多數細胞系包括原代細胞都有較高的轉染效率，并且對細胞毒性極低。本轉染試劑可應用于瞬時轉染、穩定轉染、共轉染、高通量DNA轉染，基因表達和基因功能研究。
注意事項
?1.轉染試劑使用前應先震蕩搖勻。
?2.轉染效率與細胞密度有很大關系，不同實驗間應保持一個基本的傳代步驟，確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。
????一般貼壁細胞轉染的最佳細胞密度是80-90%，懸浮細胞的最佳細胞密度為3-5×10?5細胞/ml，用于轉染的最佳細胞密度
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3.?轉應染根據不同的時不要在培細養胞基中加入抗生素，否類型或用途而異。則會導致細胞死亡。??
操作步驟
?????對于大部分的細胞系，?DNA與DNAfect的比例在1:2至1:3時轉染效率較高。為了提高轉化效率、表達水平并且減少細胞毒性，實驗應在細胞密度較大時進行轉染。以下操作以24孔板每孔細胞的DNA轉染操作為例。
?????1.???貼壁細胞：轉化前一天，在24孔板的每孔中加入500?μl無抗生素的生長培養基，并于每孔中接種0.5-2×105?個細懸浮細胞：在胞，待細胞轉細染之前，在胞長至80-90%24孔板的滿時進每行孔中加入轉染。500μl無抗生素的生長培養基，并于每孔中接種3-5×10?5個細胞。
?????2.???轉染當天，首先準備轉染復合物，對于每孔細胞按照以下用量配制：
??????????a.?取適量DNA，加入25?μl無血清培養基，并輕輕的混合均勻。
??????????b.?取適量DNAfect，加入25?μl無血清培養基，輕輕混勻，并于室溫孵育5分鐘。
??????????c.?孵育5分鐘之后，將稀釋的DNA和稀釋的DNAfect混合（使DNA以及DNAfectin的終總體積為50?μl），輕輕混合均勻，并在室溫下孵育20分鐘（溶液可能會出現絮狀，但不會影響轉染效率）
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????注意：該混合物在室溫下可以穩定保存6小時。
?????3.???將步驟1中24孔板中培養的細胞生長培養基更換成450?μl無血清培養基，然后將步驟2中50?μl轉染復合物加入到24細胞孔板內，輕輕前后推動24孔板以混勻。
?????4.???將細胞置于含5%CO2，37℃條件下培養4-6小時后，更換成500?μl生長培養基。
?????5.???18-48小時后進行轉染基因表達的檢測。
?????6.???對于穩定的細胞系：在轉染24小時后，細胞按照1:10的比例傳代，第二天可加入篩選培養基進行篩選。
????????注：(1)?該說明為一個24孔的用量，若同時轉幾個孔，配制轉染復合物的量需加倍；若轉染其他類型孔板，DNA和DNAfect用量見附表，
??????????????該附表用量以293T細胞為轉染細胞時的標準用量。
?????????????(2)?轉染4-6小時后也可以不更換生長培養基，但由于DNAfect具有一定的細胞毒性，作用時間過長可能使某些細胞出現大量死亡現象，建議更換生長培養基。
????????????(3)?優化條件：想要得到更高的轉染效率，應優化轉染條件：培養物、DNA濃度、細胞數和細胞與DNA復合物的孵育時間等條件都應進行優化。
????????????附表?293T細胞轉染參考數據
??????????????????????????每孔??????????鋪板用?????????DNA（μg）和稀釋體?????????????DNAFect轉染試劑（μl）和稀
?????????????培養板
?????????????????????????表面積????????培養基體積???????????????積（μl）???????????????????釋體積（μl）
??????????????96孔?????0.3cm2????????200?μl????????0.13?μg至10?μl????????????0.5?μl至10?
??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????μl
??????????????24孔???????2cm2????????500?μl????????0.8?μg至25?μl?????????????2?μl?至25?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????μl
??????????????12孔???????4cm2?????????1ml??????????1.6?μg至50?μl
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????4?μl至50?μl
????????????35mm??????10cm2?????????2ml??????????4.0?μg至100?μl???????????10?μl至100?μl
??????????????6孔???????10cm2?????????2ml??????????4.0?μg至100?μl???????????10?μl至100?μl
????????????60mm??????20cm2?????????5ml??????????8.0?μg至500?μl???????????20?μl至500?μl
?????????????10cm?????60cm2????????10ml??????????24?μg至800ml?????????????60?μl至800?μl