1.?D-PFH-vPC具有良好的載藥穩定性和超聲成像增強能力

利用四種常用的PFCs（PFP、PFH、PFOB和PFCE）制備了四種D-vPCs；同時，D-VPL是利用正常磷脂代替硅質體制備的。通過冷凍蝕刻掃描電子顯微鏡對四種D-VPC的形態進行了表征（圖1a），發現所有D-VPC均為球形，直徑相對均勻。對納米液滴的理化特性進行分析（圖1b-h），結果顯示：研究發現D-PFP-vPCs缺乏形態穩定性和載藥穩定性；而D-PFOB-vPCs和D-PFCE-vPCs的DOX包封效率低、對M-HIFU觸發的DOX釋放反應速度慢、缺乏增強超聲成像的能力。D-PFH-vPCs同時具有良好的穩定性和增強超聲成像的能力。

2.?vPCs-O₂+M-HIFU可以有效緩解體外缺氧介導的MDR和EMT

作者首先檢測vPCs的主動腫瘤靶向能力，在溫和的酸性環境中用vPCs孵育細胞后的平均熒光強度是中性環境（pH7.2-7.4）中的2.5倍，顯示了var7靶向酸性腫瘤環境的能力（圖2a）。然后，檢測了載氧vPCs對腫瘤缺氧狀態的影響，結果顯示：vPCs-O₂+M-HIFU與細胞共孵育后，缺氧的4T1細胞轉化為較低的缺氧狀態（圖2b）；MDR相關基因如MDR1、HIF-1α和P-gp的表達量顯著降低（圖2c、d和e）。當用D-vPCs-O₂+M-HIFU處理細胞時，與D-vPCs-N₂+M-HIFU相比，DOX攝取增加了103.8%，細胞活力顯著降低62.5％，細胞凋亡活性顯著增加111.3％（圖2f-h）。綜上所述，D-vPCs-O₂+M-HIFU超聲可以緩解腫瘤細胞缺氧狀態，下調MDR相關基因和蛋白表達，增加細胞內DOX積累。

進一步研究了D-vPCs-O₂+M-HIFU對EMT的影響。經vPCs-O₂+M-HIFU處理后，遷移和侵襲細胞數量分別顯著減少70.8%和65.4%（圖2i、j）。在D-vPCs-O₂+M-HIFU處理后，與D-vPCs-N₂+M-HIFU相比，遷移細胞和侵襲細胞的數量分別顯著減少了67.0%和71.6%。ELISA定量EMT標記物的表達水平，結果如圖2k所示，vPCs-O₂+M-HIFU顯著下調缺氧細胞TGF-β1和EMT標記物如鈣粘蛋白E、Vimentin和Twist的表達水平，而低濃度DOX顯著上調其表達水平。D-vPCs-O₂+M-HIFU進一步下調已經上調的TGF-β1和EMT標記物。這表明vPCs-O₂+M-HIFU可有效抑制腫瘤細胞的EMT轉化。

3.?體內熒光成像、生物分布和M-HIFU介導的藥物釋放研究

由于DOX不適用于活體成像，制備了Cy7-vPCs、Cy7-vPLs和Cy7-Doxil。靜脈注射給單層4T1荷瘤BALB/c小鼠，體內熒光成像結果顯示：Cy7-vPCs+M-HIFU的腫瘤熒光強度曲線下面積（AUC_0-72h）比Cy7-vPCs的升高4.6倍（圖3a和b）；Cy7-vPCs+HIFU的AUC_0-72h比Cy7-PCs+HIFU的高1.7倍（圖3a，b）。中和的腫瘤AUC_0-72h明顯低于未處理的腫瘤，進一步顯示了var7靶向酸性腫瘤微環境的能力。

采用雙側異種移植瘤評估Cy7-vPCs和D-vPCs的M-HIFU反應性。如圖3c所示，靜脈注射后，僅用M-HIFU超聲處理腫瘤的一側。MDA-MB-231荷瘤BALB/c裸鼠（圖3d）或4T1荷瘤鼠（圖3e）注射游離Cy7、Cy7-vPCs或Cy7-Doxil。注射Cy7-vPCs后，經M-HIFU超聲處理的一側腫瘤的熒光明顯高于未經超聲處理的另一側腫瘤。DOX（或Cy7）的生物分布顯示：D-vPCs+M-HIFU處理后，明顯增加了在腫瘤中的DOX累積；顯著降低了心臟中的DOX蓄積（圖3g-h）。