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Q&A | 胎牛血清使用注意事項(xiàng)

作者:無錫耐思生命科技股份有限公司 2023-10-24T00:00 (訪問量:34613)

胎牛血清
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經(jīng)過三次0.1μm無菌過濾器過濾除菌,pH值、滲透壓、血紅蛋白濃度、總蛋白、總IgG、內(nèi)毒素、促進(jìn)生長(zhǎng)等多項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)合格,無細(xì)菌、支原體、生物化學(xué)污染,具有高質(zhì)量和穩(wěn)定性,適用于嬌貴細(xì)胞培養(yǎng)。

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使用注意事項(xiàng)



Q:胎牛血清的試用范圍?

適用于一般細(xì)胞,腫瘤細(xì)胞,部分干細(xì)胞等。

Q:如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

血清解凍時(shí)應(yīng)將血清從-15~-70℃的低溫冰箱中取出放入4℃冰箱解凍1天,待全部解凍后再分裝。解凍過程中請(qǐng)不時(shí)搖勻(小心勿造成氣泡),使血清成分和溫度均勻,從而減少沉淀的產(chǎn)生。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍,并避免反復(fù)凍融。需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃ - -70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)被破壞,而影響血清質(zhì)量。

Q:有時(shí)在血清中見到的絮狀沉淀可能是些什么物質(zhì)?

主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量,可用400 xg離心5 min去除,也可不用處理。

Q:如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

(1)解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
(2) 血清分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
(4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
(6) 若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。

Q:在使用前是否需要對(duì)血清進(jìn)行過濾?

一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。

Q:自然溶化好的胎牛血清放在室溫下一晚還能用嗎?

室溫不可以,建議4℃保存。

Q:熱滅活對(duì)血清的作用是什么?
不是必須的,看做什么實(shí)驗(yàn)。如果用于培養(yǎng)普通細(xì)胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長(zhǎng)因子。但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞,血清是需要滅活,一般是56℃,30min。

Q:加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎?
熱滅活步驟能夠滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。補(bǔ)體會(huì)參與以下事件中:溶解細(xì)胞事件,平滑肌收縮,肥大細(xì)胞與血小板釋放組胺,吞噬作用增強(qiáng),趨化作用,淋巴細(xì)胞與巨噬細(xì)胞的活化等。

Q:細(xì)胞培養(yǎng) 中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?
一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài),黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染,微生物則會(huì)大量繁殖,培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細(xì)胞,生長(zhǎng)狀態(tài)良好,與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):
(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過老,破碎的細(xì)胞殘骸;
(2)血清質(zhì)量不好,反復(fù)凍融的結(jié)果;
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長(zhǎng);
(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應(yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn);
(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。

Q:細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。
(3) 培養(yǎng)基保持最佳PH值7.0- 7.2。
(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。
(5) 掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī),細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過老。
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