試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被植物激素脫落酸(ABA)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物激素脫落酸(ABA)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
操作注意事項
1.? 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
2.? 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3.? 預處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。
4.? 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.? 所有液體組分使用前充分搖勻。
操作步驟
1.? 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.? 設置標準品孔、樣本孔和空白孔,空白孔什么都不加;標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3.? 待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
4.? 隨后標準品孔和樣本孔中(空白孔不加)加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體50μL,,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.? 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.? 所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.? 所有孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
免責聲明
1.?? 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或植物體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。
2.?? 嚴格按照說明書操作,不同批號不可交換使用,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。
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