*以下文章來源于華盈生物 ，作者瑞瑞
CAR-T療法正在改變腫瘤治療的前景，但其生產本身也面臨一系列挑戰。與大多數藥物不同，由于CAR-T療法使用患者自己的T細胞，是高度個性化的，細胞治療產品的質量在批次和患者之間存在顯著差異。在開發過程中，最重大的挑戰之一是表征制備CAR-T產品的質量和效力。IsoPlexis單細胞功能蛋白組學技術可以幫助研究者很好的迎接這方面的挑戰。
IsoPlexis系統檢測每個單個細胞分泌的特定細胞因子，并識別多功能細胞和細胞亞群（分泌兩個或更多細胞因子），這些亞群在多種研究和疾病治療相關。IsoPlexis平臺還可以在表型相同的樣本中檢測到細胞功能異質性，這些細胞及其異質性帶來的特質會被流式技術或群組檢測的技術忽略。IsoLight全自動單細胞蛋白質組學分析系統可以對不同亞群的CAR-T細胞（CD4+/CD8+）進行功能的深度分析，多項研究數據顯示CAR-T細胞的多功能性指數（PSI）與患者臨床結果關聯，未來可成為細胞治療產品的療效預判與監控（圖1）。
圖1單細胞多功能性指數成為評估CAR-T細胞質量的重要指標
研究人員使用Miltenyi自動化系統進行上游的靶向CD19/CD22雙特異性CAR-T制備，接著使用IsoLight單細胞分析平臺進行下游的細胞功能質量評估（圖2）。
圖2 IsoLight單細胞蛋白質組分析系統成為CAR-T細胞生產工藝中的關鍵一環
研究人員采用了兩種生產制備方法，對比了不同的方法制備的CAR-T細胞的差異。第一種方法（M1）在第5天以洗滌步驟終止轉染，而第二種方法（M2）在第3天終止轉染。復蘇的CAR-T細胞用抗CD4或抗CD8磁珠分選，并與表達CD19或CD22抗原的靶細胞共培養。去除靶細胞后，將CAR-T細胞懸液載入IsoCode單細胞蛋白質組芯片，捕獲單細胞的細胞因子信號，數據使用IsoSpeak軟件進行分析（圖 3）。
圖3 Isoplexis分析CAR-T細胞的基本流程
結果表明，無論是靶向CD19還是CD22的CD4+或者CD8+的CAR-T細胞產品，使用M2方法制備得到的細胞，細胞多功能指數更高(圖4)。即使用M2制備的CAR-T產品表現出更高的多功能性，也表現在效應性因子和刺激性細胞因子的增加。這一單細胞多功能數據清楚地表明，與之前使用的M1相比，M2顯著改善了雙特異性CD19/CD22 CAR-T細胞產品的功能。
圖4??單細胞多功能性用于評估不同制備方法得到的CAR-T細胞產品
在評價CAR-T產品評價過程中，細胞數量和活力的增加并不總是與細胞功能的增強跟最終治療效果正相關。而Isoplexis單細胞功能蛋白組分析獲得 的細胞多功能指數(Polyfunctional Strength Index PSI)同時結合了數量和活力的維度。PSI同時涵蓋了細胞因子分泌的廣度(多功能，即分泌兩個或更多細胞因子的單個CAR-T細胞)和細胞因子分泌的強度（分泌量）。PSI可以作為獨特的標尺在治療應用之前評估細胞產品的效力。
早在2018年一篇Blood雜志文章中研究了治療非霍奇金淋巴瘤(NHL)靶向CD19 CAR-T細胞，檢測了在輸注前CAR-T細胞的多功能性及PSI指數，并發現與臨床結果有正相關性。研究表明，這些患者輸注前CAR-T的多功能性與患者接受治療后的客觀反應(OR)和細胞因子釋放綜合征(CRS)具有統計學正相關性，通過單細胞體外實驗能夠預測臨床治療結果及不良反應。PSI可以有效區分對治療有應答者和無應答者（圖5）。
圖5 CAR-T細胞PSI與患者預后具有顯著相關性
2020年Gastroenterology雜志發表一項CAR-T改良方法靶向實體瘤的研究。研究對比分析了靶向肝細胞癌高表達 的GPC3兩個不同抗原表位的CAR-T功效。研究者首先體外實驗發現了靶向hYP7的CAR-T細胞比靶向HN3的CAR-T細胞具有更強的腫瘤殺傷能力。為了佐證這一結果，研究者采用了Isoplexis單細胞功能蛋白組分析兩種CAR-T細胞，結果發現了hYP7-CAR-T細胞具有更高的多功能性指數（PSI）。Isoplexis分析結果和體外效能相一致，為下一步的體內實驗提供了重要的質控評估依據。最終的體內實驗也證實了hYP7-CAR-T細胞具有更強的抑制和消除腫瘤細胞的能力（圖6）。
圖6 單細胞功能蛋白組作為CAR-T細胞功效的質量評估指標
IsoPlexis 商家主頁
地 址： 暫無
聯系人： 苗先生
電 話： 4001118515
傳 真： 暫無
Email：Info.apac@isoplexis.com
相關咨詢
蘇州專場路演活動 | 2023 PhenomeX 技術分享會報名正式開啟！ (2023-07-10T16:56 瀏覽數:39179)
如何表征過繼性細胞療法？這份最新應用說明請收好！ (2023-06-20T10:10 瀏覽數:42411)
固有免疫與適應性免疫？單細胞功能蛋白質組學幫你理理清 (2023-06-14T09:56 瀏覽數:64221)
又見PhenomeX——帶你認識細胞表型全能選手的看家本領 (2023-06-08T16:03 瀏覽數:46351)
探索患者細胞治療應答，助力更安全有效的治療 (2023-05-24T13:27 瀏覽數:42712)
5.26直播預告 | 邀您探索“免疫細胞功能的全面表征” (2023-05-18T17:17 瀏覽數:41103)
初識PhenomeX——“基因+蛋白+表型”全能型選手的養成之路 (2023-05-18T17:14 瀏覽數:43871)
爆款芯片體驗第二彈 | 先到先得，快來報名！ (2023-05-11T10:47 瀏覽數:37966)
人單核細胞來源樹突狀細胞的單細胞分析：PhenomeX最新解決方案助力擴展免疫系統表征 IsoPlexis IsoPlexis​ (2023-05-11T10:31 瀏覽數:43807)
異體細胞治療 – 利用單細胞多功能蛋白組技術監測細胞質量和預測療效 (2023-05-05T11:07 瀏覽數:45615)