?AMRESCO瓊脂糖使用指導
產品：?瓊脂糖
貨號：?0710 0815 E776
??? E434 ??? J234 ???? X174
正確的加熱方式對瓊脂糖的充分溶解和凝結至關重要，在此，我們提供以下幾點作為正確制備瓊脂糖凝膠的操作參考。
l?AMRESCO瓊脂糖加熱溶解所需時間短。
l?瓊脂糖在TAE或者TBE緩沖液中不溶解，加熱時，瓊脂糖顆粒水化形成溶液，水化是時間依賴的，不同的瓊脂糖水化點不同。AMRESCO瓊脂糖純度高，超微顆粒，非常適合作為電泳實驗載體。對比于其他的瓊脂糖，AMRESCO瓊脂糖水化速度快，使用者無需煮沸過長時間，否則易導致膠液濃稠，不利于混勻，凝膠后易破損。
AMRESCO瓊脂糖凝膠制備
用1×TBE溶液配制1%濃度瓊脂糖凝膠
1.?用于制備膠液的錐形瓶體積應為膠液體積的2-4倍，緩慢向緩沖液中加入瓊脂糖，邊加邊攪拌，防止瓊脂糖聚集。記錄瓶體和溶液總重量。
2.?微波爐高火加熱30s，根據配制的溶液體積調整加熱時間。加熱時間與微波爐、瓶體大小和瓊脂糖濃度有關。
3.?搖勻瓊脂糖溶液。
4.?再次高火加熱30s，搖勻瓊脂糖溶液。
5.?將溶液再次放回微波爐，高火加熱至沸騰（大約10-35s）。接觸移動時瓊脂糖膠液可能會劇烈沸騰，小心操作，避免燙傷。從微波爐拿出后，室溫冷卻1-2min，輕輕搖晃使液體里的氣泡溢出。
6.?重新放回微波爐，高火加熱，使之沸騰約15s，觀察瓊脂糖的溶解狀態，如果仍有顆粒存在，重復該步驟直至所有晶體全部溶解。
7.?待瓊脂糖完全溶解成液體，重新稱量總重量，計算蒸發液體量，用水補齊至原始重量，搖勻液體。
8.?建議膠液冷卻至50-55℃時灌膠，有利于凝膠孔徑均勻一致，不至于損傷制膠儀。灌膠前輕輕搖晃瓊脂糖溶液，釋放膠液中殘存的氣泡。
9.?向制膠槽中灌膠，一般膠的厚度3-5mm，灌膠后盡量排除梳孔之間或底部的氣泡。
10.?在室溫放置（30-45min）使膠充分凝結。
如果要制備不同濃度和不同體積的凝膠，請注意以下兩點：
1.?在凝膠溶液煮沸前至少進行2次搖勻。
2.?膠液沸騰后，每隔10-15s觀察一次膠液溶解程度（間隔時間取決于膠液濃度和體積）。
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Guidelines for small fragment resolution using AMRESCO Agaroses
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片段大小 |
Agarose Ⅱ 0815 |
Agarose 3:1 ? E776 |
J234 |
備注 |
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＜0.5kb 分析 ～2% |
不建議 |
4-5% TBE Buffer |
3.5-5% TAE or TBE Buffer |
Agarose SFR適合，Agarose 3:1透明度較差 |
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＜0.5kb 分析 ～3-5% |
3-4% TBE Buffer |
3% TBE Buffer |
3-4% TAE or TBE Buffer |
Agarose SFR和Agarose 3:1在指定濃度下機械強度較Agarose Ⅱ高，不易碎。 |
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＜0.5kb 制備 ? |
2-4% TAE or TBE Buffer |
不建議 |
2-5% TAE or TBE Buffer |
濃度根據分辨率來選擇。低濃度能提高片段回收純度，TBE緩沖液不適合一些商品化的回收試劑盒。 |
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0.5-2.0kb 分析 |
1.5-2.5% TBE Buffer |
1.5-2.5% TBE Buffer |
1.5-2.5% TBE Buffer |
Agarose SFR電泳時間長，易導致片段彌散 ? |
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0.5-2.0kb 制備 |
1.5-2.5% TAE or TBE Buffer |
不建議 |
1.5-2.5% TAE or TBE Buffer |
Agarose Ⅱ適合，1kb以上更佳。TBE緩沖液不適合一些商品化的回收試劑盒。 ? |
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1.0-3.0kb 分析 |
1-1.5% ? |
1-1.5% ? |
1% ? |
Agarose 3:1適合Agarose Ⅱ凝膠強度不適合印記實驗。 Agarose SFR電泳時間長，易導致小片段彌散 ? |
以上數據僅供參考，具體選擇依據實際試驗要求。
參考電壓5V/cm，低熔點瓊脂糖電泳超過1小時者，選擇較低電壓3-4V/cm或者在4℃條件下電泳。