大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞
大鼠
3-4h
Ⅷ因子相關(guān)抗原
IHC/IF
大鼠膀胱逼尿肌細(xì)胞
大鼠
3-4h
α-SM-Actin
IHC/IF
大鼠心肌細(xì)胞
大鼠
4-5h
α-actin
IHC/IF
大鼠心肌成纖維細(xì)胞
大鼠
3-4h
a-SA抗體
IHC/IF
小鼠血管平滑肌細(xì)胞
小鼠
3-4h
肌動(dòng)蛋白α-SMA
IHC/IF
大鼠牙源性間充質(zhì)細(xì)胞
大鼠
3-4h
波形絲蛋白（vimentin）
角蛋白（keratin）
IHC/IF
小鼠脾臟淋巴細(xì)胞
小鼠
小鼠巨噬細(xì)胞
小鼠
小鼠附睪精子細(xì)胞
小鼠
老年鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞
老年鼠
3-4h
D44+CD45-
流式表面抗原檢測(cè)
瘢痕組織成纖維細(xì)胞
瘢痕組織
3-4h
波形蛋白
IHC/IF
大鼠皮層神經(jīng)元干細(xì)胞﹡
大鼠
3-4h
Nestin
IHC/IF
骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）﹡﹡
骨髓
3-4h
CD34與CD133
IHC/IF
﹡：神經(jīng)元干細(xì)胞原代培養(yǎng)通常需要額外的細(xì)胞因子如B-27、EGF、bFGF
﹡﹡：EPCs原代培養(yǎng)需要特殊培養(yǎng)基
,
威斯騰原代細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞藥篩
威斯騰生物經(jīng)過10多年的發(fā)展，獲得了上百種細(xì)胞株和四十余鐘原代細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，并建立了龐大的細(xì)胞庫及原代培養(yǎng)資料庫；細(xì)胞平臺(tái)有資深實(shí)驗(yàn)員、規(guī)范的SOP操作文件，萬級(jí)凈化細(xì)胞房，這些條件為保質(zhì)保量完成每個(gè)客戶的實(shí)驗(yàn)提供了保障。
同時(shí)，威斯騰生物結(jié)合多年原代及傳代細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合平臺(tái)已有的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，建立了完善的體外藥篩實(shí)驗(yàn)，并引進(jìn)RTCA（Real-time cellular Analysis，實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞記錄儀），在藥篩過程中，全程實(shí)時(shí)記錄細(xì)胞真實(shí)狀況，為藥篩提供最真實(shí)精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
威斯騰生物與上海中科院生物與細(xì)胞所化學(xué)生物學(xué)技術(shù)平臺(tái)合作，享有英國國家醫(yī)學(xué)研究院科技轉(zhuǎn)化部MRCT獨(dú)家提供的約1萬種核心結(jié)構(gòu)小分子化合物庫資源，基于成藥性結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，特別適于進(jìn)行以新藥研發(fā)為目的的活性化合物篩選。精選SiRNA庫，包含20個(gè)亞庫，可根據(jù)需求定制提高通路篩選。
原代細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)典案例
1、淋巴細(xì)胞的原代培養(yǎng)
淋巴細(xì)胞主要來源：脾臟、外周血
分離方法：Ficoll-hypaque（葡聚糖－泛影葡胺）密度梯度離心法，因?yàn)檠褐懈鞒煞值谋戎卮嬖诓町悾虼说靡苑蛛x。
分離效果：?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞純度可達(dá)95％，淋巴細(xì)胞約占90％～95％，細(xì)胞獲得率可達(dá)80％以上，其高低與室溫有關(guān)，超過25℃時(shí)會(huì)影響細(xì)胞獲得率。
步驟：
1）眼球取血，將血液滴入肝素抗凝管中，加入PBS按1：1稀釋血液（一般采血管2mL+2mL）。
2）取淋巴細(xì)胞分離液2mL于15mL滅菌離心管中待用。
3）吸取稀釋血液，在離分層液上方1cm處，沿試管壁徐徐加入，使稀釋血液重疊于分層液上，并與分離液形成明顯界面。
4）室溫，離心2000rpm，20min。此時(shí)離心管中形成5層：最上面是血漿，血漿層和淋巴細(xì)胞分離液之間是淋巴細(xì)胞層呈白膜狀。
5）小心吸取中間呈白膜狀的淋巴細(xì)胞層，盡量全部吸出。加5倍以上體積的PBS洗2次，每次離心1500rpm，10min。
6）去上清液，加入1640培養(yǎng)基1mL混勻，取少量進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
7）用臺(tái)盼藍(lán)染液檢查所分離的細(xì)胞活性：活性應(yīng)在95％以上。
8）接種后培養(yǎng)，條件為37℃、5%CO2、飽和濕度。3d后，每48h添加等體積的新鮮培養(yǎng)基。
淋巴細(xì)胞
2、乳鼠心肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)
原理：
乳鼠心肌細(xì)胞屬于原代生長(zhǎng)細(xì)胞。心肌組織中心肌細(xì)胞約占50%，非心肌細(xì)胞占50%，用酶消化法將心肌組織碎塊經(jīng)純化分離成單個(gè)心肌細(xì)胞，用培養(yǎng)基制成心肌細(xì)胞懸液，內(nèi)心肌細(xì)胞可達(dá)95%，在體外適宜條件下，使心肌細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖，并保留其一定的結(jié)構(gòu)和功能特性。在乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中能直接觀察到培養(yǎng)心肌細(xì)胞生命活動(dòng)的動(dòng)態(tài)過程，還可利用電鏡手段、同位素標(biāo)記、放免法和免疫組化法來研究細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)化學(xué)物質(zhì)的分布。
步驟：
1）新生乳鼠剪開胸，取心尖部位。
2）剔除周圍結(jié)締組織，將心臟置于無菌平皿中，將心臟盡量剪碎，平皿內(nèi)加入適量0.125%的胰酶，在37℃培養(yǎng)箱中，采用分次消化，每次消化5min，一共消化8-10次。
3）每次消化后取上清液，中和胰酶的消化，防止消化過度。用200目過濾篩過濾混合液。離心后收集沉淀，用PBS再次重復(fù)離心3次。用細(xì)胞培養(yǎng)基將細(xì)胞沉淀重懸，接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
4）培養(yǎng)90min左右，將未貼壁的細(xì)胞懸液吸出。此時(shí)已經(jīng)貼壁的是心肌成纖維細(xì)胞。
5）將未貼壁的細(xì)胞懸液放入新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，并每日觀察心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)。
心肌細(xì)胞48h
3、神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)
步驟：
1）出生 2 d SD大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉麻醉后，碘酒、75％乙醇消毒腹部皮膚，依次剪開皮膚、肌肉、皮下筋膜，無菌操作下取出胚胎放入預(yù)冷的D-Hanks平衡鹽液中。
2）在解剖顯微鏡下分離并取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織成約1mm3大小，加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱內(nèi)消化20min，中間搖晃一次。
3）用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的培養(yǎng)液（DMEM＋10％FBS）的離心管內(nèi)終止消化液作用5min。
4）用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的DMEM＋10％FBS的離心管內(nèi)，用火焰拋光的巴斯德滴管吹打數(shù)次，靜置后取上清吸到另一支離心管內(nèi)。重復(fù)上述步驟2～3次。
5）將所收集的上清經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾。
6）過濾后的細(xì)胞懸液于800r/min離心5min，棄上清，管內(nèi)加入新鮮培養(yǎng)液（DMEM＋20％FBS）并吹打成單細(xì)胞懸液。
7）細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度按1.5×105/cm2種入6孔板內(nèi)，放入CO2孵箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)48h后換液并加入Ara-C使其終濃度為1×10-5mM/L。Ara-C作用24h后全量換液。以后每隔3天半量換液一次。
皮層神經(jīng)元
4、小鼠血管平滑肌細(xì)胞（組織貼塊法）
試驗(yàn)方法：組織貼塊法
步驟：
1)頸椎脫臼處死小鼠，開胸、腹腔，暴露心臟剪取胸主動(dòng)脈
2)用鑷子輕輕剝離血管外結(jié)締組織
3)用眼科剪沿縱軸剪開血管條，無菌鑷輕輕刮除內(nèi)膜
4)用鑷子鈍性加壓刮中膜,待出現(xiàn)裂口后夾住中膜將其取出
5)將取下的中膜加入含 20%FBS 的 DMEM 培養(yǎng)液，用眼科剪剪碎成血管條；
6)用無菌滴管將組織塊吸入細(xì)胞培養(yǎng)瓶，均勻鋪于瓶壁，間距約 0.2～0.5cm；
7)將培養(yǎng)瓶直立放置于培養(yǎng)箱；1h 后輕輕放平
8) 每 3d 換液 1 次； 3～8代用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)
血管平滑肌細(xì)胞
五、中心可提供的原代培養(yǎng)種類