1.膜蛋白結(jié)構(gòu)研究
生物學(xué)研究表明,蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)決定其功能,膜蛋白也不例外,因此對于膜蛋白結(jié)構(gòu)的研究一直以來也都是該領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。上世紀(jì)80年代,世界上第一個(gè)膜蛋白三維結(jié)構(gòu)——細(xì)菌光合作用中心晶體結(jié)構(gòu)被公布。至今,隨著生物技術(shù)的進(jìn)步,膜蛋白結(jié)構(gòu)生物學(xué)也在不斷發(fā)展。
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世界上第一個(gè)膜蛋白三維結(jié)構(gòu)圖
現(xiàn)今,膜蛋白結(jié)構(gòu)研究的三大主要技術(shù)分別是:X-射線晶體衍射、生物冷凍電鏡和核磁共振技術(shù)。各種技術(shù)各有所長,適合于不同的膜蛋白或者不同的實(shí)驗(yàn)需求,也常常將幾種技術(shù)相結(jié)合,以發(fā)揮各自優(yōu)勢互補(bǔ),對膜蛋白的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析。
蛋白質(zhì)的折疊加工形成立體結(jié)構(gòu),通過對膜蛋白樣品的晶體形成進(jìn)行三維重構(gòu),從而解析膜蛋白的三維結(jié)構(gòu)。膜蛋白的結(jié)晶方法也有多種,主要分為傳統(tǒng)方法和脂相結(jié)晶法。都是先將純化后的膜蛋白從去污劑復(fù)合物中置換到脂環(huán)境中,然后進(jìn)行結(jié)晶,其主要區(qū)別在于傳統(tǒng)結(jié)晶法相對于脂相結(jié)晶法,對去污劑有更大的依賴性。有時(shí)也可借鑒于可溶性蛋白的結(jié)晶方法,如抗體片段的方法也被多次用于促進(jìn)膜蛋白結(jié)晶。
2.膜蛋白功能研究
膜蛋白具有廣泛多樣的功能, 是生物體所必須的蛋白質(zhì)。如一些膜蛋白作為載體和通道,運(yùn)輸不同離子、分子或其它蛋白質(zhì);一些膜蛋白則充當(dāng)受體的角色,將環(huán)境中信息傳遞至細(xì)胞內(nèi),使細(xì)胞以適應(yīng)外環(huán)境;還有一些膜蛋白做為骨架蛋白提供錨定和維持細(xì)胞形態(tài)等等作用。不同類型的膜蛋白各按其所行使著各自的功能,保證了生物體正常發(fā)育生長。這也是研究膜蛋白功能的生物學(xué)意義。
■轉(zhuǎn)運(yùn)膜蛋白研究
蛋白質(zhì)相互作用的驗(yàn)證是對膜蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)研究的主要方式,將蛋白從胞外轉(zhuǎn)運(yùn)到胞內(nèi)或者將胞內(nèi)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到質(zhì)膜上,很大程度上與膜蛋白本身的靶向修飾以及各種適配蛋白間的相互作用有關(guān)。
?Co-IP
Co-IP是研究蛋白質(zhì)互作的傳統(tǒng)經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法,要求已知蛋白質(zhì)屬性以孵育特異性抗體檢測。優(yōu)寧維為您提供專業(yè)的Co-IP試劑盒,幫助您獲得準(zhǔn)確可信的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
?Immunome蛋白質(zhì)芯片
Sengenics—Immunome蛋白質(zhì)芯片技術(shù),可應(yīng)用于自身抗體研究、預(yù)測毒理學(xué)和蛋白質(zhì)相互作用。正確折疊和自然立體構(gòu)象對于蛋白質(zhì)功能的發(fā)揮有著非常重要的影響,而Immunome蛋白質(zhì)芯片中的每一個(gè)蛋白質(zhì)都是通過生物素羥基載體蛋白(BCCP)折疊標(biāo)準(zhǔn)在框架結(jié)構(gòu)內(nèi)復(fù)制,只有折疊正確的蛋白質(zhì)才會(huì)被生物素化,并固定在芯片中。
蛋白質(zhì)芯片技術(shù)給蛋白質(zhì)組學(xué)的研究帶來新的思路,可以高通量地分析蛋白質(zhì)功能和相互作用,此技術(shù)具有快速、操作簡便、樣品用量少等優(yōu)勢,并且芯片上的膜蛋白保持了跨膜結(jié)構(gòu)的完整性與生物功能,可得出更加準(zhǔn)確的相互作用結(jié)果。優(yōu)寧維為您帶來獨(dú)家Sengenics蛋白芯片技術(shù),助力于膜蛋白的功能研究。
?HTRF?
傳統(tǒng)的熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)也是研究分子之間相互作用的常用方法之一。通過對TR-FRET技術(shù)進(jìn)一步改良的HTRF?技術(shù),具有更高的靈敏度和穩(wěn)定性,應(yīng)用范圍廣泛。
HTRF?技術(shù)應(yīng)用于膜蛋白研究領(lǐng)域,如G蛋白偶聯(lián)受體的研究、相互作用的分析等。主要原理是通過測定一定條件下的細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度便能推斷出GPCR與G蛋白是否結(jié)合。或者通過測定細(xì)胞內(nèi)IP1的濃度推斷Gq蛋白是否與GPCR相結(jié)合,從而研究膜蛋白之間相互作用,探討其功能作用。
■離子通道膜蛋白研究
膜蛋白在神經(jīng)信號傳導(dǎo)過程中也發(fā)揮了重要的作用,當(dāng)配體分子與膜蛋白感受器結(jié)合以后,會(huì)激發(fā)一系列反應(yīng),最終把化學(xué)信號轉(zhuǎn)換成電信號,傳遞給神經(jīng)系統(tǒng),最后做出相應(yīng)指令。
■受體類膜蛋白與信號傳導(dǎo)
受體蛋白也是膜蛋白的重要類型之一,通過配體與受體膜蛋白的作用,可激發(fā)或者抑制某些胞內(nèi)信號通路,從而參與影響細(xì)胞乃至生物體的生理功能和一些病理進(jìn)程。因此這些受體類膜蛋白往往具有重要的生理和藥理功能,是重要的藥物作用靶標(biāo),研究這些重要受體的生物學(xué)和藥理學(xué)功能,也是創(chuàng)新藥物研發(fā)的重要基礎(chǔ)。
研究受體類膜蛋白相關(guān)功能,可以通過激動(dòng)劑/抑制劑人為調(diào)節(jié)某些受體的活性,或通過RNAi或基因編輯技術(shù)直接對受體類膜蛋白進(jìn)行表達(dá)水平的調(diào)整,然后對多種關(guān)鍵信號通路分子或細(xì)胞分泌因子進(jìn)行檢測,從而研究和推測膜蛋白的功能作用。優(yōu)寧維為您提供多種實(shí)驗(yàn)方案,助力于膜蛋白功能研究。
此類研究的對象主要為細(xì)胞及模式動(dòng)物,樣品質(zhì)量的保證是后續(xù)實(shí)驗(yàn)成功的基礎(chǔ)。針對細(xì)胞培養(yǎng),優(yōu)寧維為您提供整體的相關(guān)產(chǎn)品試劑及耗材。
?細(xì)胞培養(yǎng)
對受體類膜蛋白的活性或表達(dá)調(diào)控,優(yōu)寧維為您提供多種方案處理樣品實(shí)驗(yàn)組,例如多種受體蛋白的的激動(dòng)劑及抑制劑;以及siRNA轉(zhuǎn)染及CRISPR/Cas9質(zhì)粒等產(chǎn)品,助力您研究膜蛋白在生物體中的功能。
?蛋白受體激動(dòng)劑/抑制劑
?siRNA轉(zhuǎn)染
調(diào)控相應(yīng)受體膜蛋白的活性或表達(dá)量后,對細(xì)胞乃至動(dòng)物體產(chǎn)生哪些影響,需要我們通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步檢測研究。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路分子的檢測是探討受體膜蛋白對胞內(nèi)生理或病理進(jìn)程的重要檢測指標(biāo)。優(yōu)寧維為您提供CST專業(yè)信號通路抗體,幫助您分析研究信號通路關(guān)鍵分子的表達(dá)情況,進(jìn)而探討膜蛋白的功能作用。
?信號通路抗體
細(xì)胞因子(cytokine)是由細(xì)胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質(zhì),在免疫調(diào)節(jié)、炎癥應(yīng)答、腫瘤轉(zhuǎn)移等生理和病理過程中起重要作用,細(xì)胞因子的表達(dá)改變也可能是膜蛋白活性及表達(dá)改變的影響現(xiàn)象之一。因此,對細(xì)胞上清液、血清、血漿、組織液等樣本中的細(xì)胞因子水平進(jìn)行檢測,也是研究膜蛋白功能的重要手段之一。優(yōu)寧維為您提供多種單/多因子檢測技術(shù)與產(chǎn)品,助力細(xì)胞因子表達(dá)檢測。
?基于流式平臺CBA
CBA(Cytometric Bead Array),即微量樣本多指標(biāo)流式蛋白定量技術(shù)是一個(gè)基于流式細(xì)胞檢測系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測方法,它能夠同時(shí)對單個(gè)樣品中的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行檢測。
?基于luminex平臺的xMAP技術(shù)
應(yīng)用熒光編碼微球帶有針對不同目標(biāo)分子的特異性抗體,不同的微球在一定程度上可以自由組合,這樣在一次實(shí)驗(yàn)中可以同時(shí)完成多個(gè)目標(biāo)分子的分析。
?基于MSD平臺 的電化學(xué)發(fā)光超敏多因子檢測技術(shù)
MSD電化學(xué)發(fā)光技術(shù)主要基于超敏多因子電化學(xué)發(fā)光分析儀MESO Sector 600或Quickplex SQ 120。通過點(diǎn)陣技術(shù),在96孔石墨電極板里可 實(shí)現(xiàn)10個(gè)指標(biāo)每孔的檢測。也可在24孔板里 定制實(shí)現(xiàn)100指標(biāo)/孔的篩選檢測。
?R&D金標(biāo)準(zhǔn)ELISA技術(shù)
傳統(tǒng)的夾心法ELISA產(chǎn)品,用于細(xì)胞因子檢測,有靈敏度高,指標(biāo)覆蓋廣,檢測結(jié)果可靠等優(yōu)勢。、
■檢測功能
多種生物指標(biāo)可衡量生物的生長發(fā)育狀態(tài),在膜蛋白功能實(shí)驗(yàn)中,也可以通過不同的技術(shù)檢測手段檢測處理過后的細(xì)胞的生理變化,從而分析膜蛋白的功能。MTT法(MTT比色法)是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法,廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)等,具有靈敏度高、經(jīng)濟(jì)適用等特點(diǎn)。
?MTT法
