干貨 | CoIP, CHIP, RIP分不清？-技術(shù)前沿-資訊-生物在線

干貨 | CoIP, CHIP, RIP分不清？

作者：無(wú)錫耐思生命科技股份有限公司 2024-01-23T00:00 (訪問(wèn)量:40431)

免疫沉淀（Immunoprecipitation），又被稱為IP，是一種利用抗體與抗原之間的特異性結(jié)合，以及細(xì)菌蛋白質(zhì)的“protein A/G”與抗體FC片段的結(jié)合特性開發(fā)出的技術(shù)。簡(jiǎn)而言之，抗原與抗體之間的關(guān)系就像是一把鑰匙對(duì)應(yīng)一把鎖，而“protein A/G”則像是一條鑰匙鏈，能夠幫助我們快速找到對(duì)應(yīng)的鑰匙（抗體）。

CoIP、CHIP和RIP這些技術(shù)之間的差異主要在于與抗體結(jié)合的物質(zhì)。

CoIP中的B代表蛋白質(zhì)，CHIP中的B代表DNA，而RIP中的B則代表RNA。

1、CoIP技術(shù)

CoIP技術(shù)利用抗體的特異性反應(yīng)來(lái)純化和富集目標(biāo)蛋白質(zhì)。

具體流程如下：先將抗體與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中的相應(yīng)蛋白結(jié)合，再與蛋白A/G偶聯(lián)的瓊脂糖或Sepharose珠子進(jìn)行孵育。通過(guò)離心，我們可以得到一個(gè)包含珠子、蛋白A/G、抗體和目標(biāo)蛋白的復(fù)合物（如果使用MagBeads，則可以通過(guò)磁力進(jìn)行分離）。在高溫和還原劑的作用下，抗原與抗體分離，收集上清液，其中包含抗體、目標(biāo)蛋白和一些雜蛋白。

2、CHIP技術(shù)

CHIP技術(shù)的原理則是利用抗原A與DNA B的結(jié)合，通過(guò)純化分析結(jié)合后的目的DNA片段，來(lái)獲取蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。

具體流程與CoIP類似：先將抗體與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中的相應(yīng)蛋白結(jié)合，再與蛋白A/G偶聯(lián)的瓊脂糖或Sepharose珠子進(jìn)行孵育。通過(guò)離心，我們可以得到一個(gè)包含珠子、蛋白A/G、抗體和目標(biāo)蛋白的復(fù)合物（如果使用MagBeads，則可以通過(guò)磁力進(jìn)行分離）。在高溫和還原劑的作用下，抗原與抗體分離，收集上清液，其中包含抗體、目標(biāo)蛋白和一些雜蛋白。

3、RIP技術(shù)

RIP技術(shù)的基本原理是利用抗原A與RNA B的結(jié)合，通過(guò)對(duì)目標(biāo)RNA片段進(jìn)行純化分析，來(lái)獲取RNA與蛋白質(zhì)相互作用的詳細(xì)信息。

具體流程如下：首先，將抗體與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清液中的相應(yīng)蛋白質(zhì)結(jié)合。接著，將這一混合物與蛋白A/G偶聯(lián)的瓊脂糖或Sepharose珠子進(jìn)行孵育。通過(guò)離心，我們可以獲得一個(gè)珠子-蛋白A/G-抗體-目標(biāo)蛋白質(zhì)的復(fù)合物（如果使用MagBeads，則可以通過(guò)磁力分離得到這一復(fù)合物）。在高溫和還原劑的作用下，抗原與抗體分離，收集上清液。上清液中包括抗體、目標(biāo)蛋白質(zhì)和少量其他蛋白質(zhì)。