?誘導多能干細胞毒性實驗

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優勢

1. ? 簡易、快速的通過檢測細胞貼壁面積進行96或384孔板細胞毒性篩選

2. ? 按照一般微孔讀板機的簡單流程

3. ? 具有細胞影像數據，增加數據可信性

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藥物引起的組織毒性是候選藥物未能進入市場的一個重要原因，因此，安全性和有效性試驗的高度預測分析是提高藥物開發和降低候選藥物抗藥性的關鍵。人源誘導多能干細胞(iPSC)衍生的肝細胞和神經元，表現出成體細胞的典型特征和新陳代謝機制，是作為早期藥物開發過程中高內涵篩選的理想選擇。

雖然使用熒光和化學發光讀板機檢測標準細胞毒性實驗已經眾所周知，但是，如果使用細胞成像計數儀進行實際細胞觀察會獲得更多有用信息。

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通過標準存活力實驗獲得更多信息

細胞存活力染料，如Calcein AM，可以用來檢測總化合物在活細胞中的毒性。Calcein AM只在表現出酯酶活性的活細胞內才會發出綠色熒光。iPSC來源的人肝細胞，首先加入不同化合物處理24小時，然后用Calcein AM染色；活細胞圖像使用SpectraMax? MiniMax? Imaging Cytometer獲取(SpectraMax? i3多功能檢測平臺的升級選項)?；罴毎麅鹊木G色胞漿區域使用SoftMax? Pro軟件內的細胞增殖分析模塊進行鑒定(Figures 1 和 2)， IC50值測定使用軟件內的曲線擬合函數直接算出(Figure 3)。

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神經元

神經元的毒性體現在數量減少或神經突觸的長度減少上(甚至存在于不影響細胞的數量或存活力的情況下)。通過成像實驗不僅可以檢測神經元細胞的主體，同時還可以檢測神經元細胞的軸突和樹突，提供了更多的細

胞生長信息。

iPSC-神經元細胞以5,000 cells/孔種于384孔板，培養5天，然后加入按照1:2梯度稀釋的視黃酸，四復孔排列，24小時處理，然后固定細胞，并使用AlexaFluor 488標記的微管蛋白抗體染色。

每個觀察視野可以觀測超過2000個細胞，接近30%的孔面積，然后使用SoftMax Pro軟件內的細胞計數分析模塊進行分析(Figure 4)。

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毒性實驗的更多信息

SpectraMax MiniMax 細胞成像系統可以提供細胞圖像數據和細胞形態信息，可以補充讀板機只有熒光強度的微孔板數據。其他如細胞計數、細胞密度等參數設置在評價化合物的iPSC肝細胞或神經元細胞毒性方面有著很高價值。

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?Top:隨著視黃酸的濃度增加(從上往下，第一排為對照)，神經軸突的生長減少。紫色疊圖(右列)為識別的細胞和神經軸突。

Right:根據濃度和疊圖區域面積進行曲線擬合作圖

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