人抗單鏈DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用???????目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中抗單鏈DNA抗體(ssDNA)水平。上海研謹生物高品質ELISA試劑盒供應商，品質卓越，售后完善。歡迎垂詢，并提供免費代檢測服務。

實驗原理：

???本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中人抗單鏈DNA抗體(ssDNA)。用純化的抗單鏈DNA抗體(ssDNA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中抗單鏈DNA抗體(ssDNA)相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗單鏈DNA抗體(ssDNA)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人抗單鏈DNA抗體(ssDNA)的存在與否。

試劑盒組成：

樣本處理及要求：

1.?血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

2.?血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3.?尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4.?細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5.?組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6.?標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7.?不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1.?編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.?加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.?溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。???

4.?配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

5.?洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.?加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。?

7.?溫育：操作同3。

8.?洗滌：操作同5。

9.?顯色：每孔先加入顯色劑A?50μl，再加入顯色劑B?50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘

10.?終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。