?Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium)，也稱Heat-labile Bacterial UDG，即熱敏型細菌UDG，來源于嗜冷海洋細菌(psychrophilic marine bacterium) BMTU3346，可催化含尿嘧啶的DNA鏈中的尿嘧啶(dU)堿基和脫氧核糖之間的N-糖苷鍵發生水解，從而釋放游離尿嘧啶。Uracil-DNA Glycosylase (UDG)可以水解含有dU的單鏈或雙鏈DNA，但不能水解RNA或含有dU的長度不超過6個堿基DNA寡聚體。
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UDG主要應用于消除PCR擴增過程中帶來的產物污染問題。其防止污染的原理為：在PCR反應中加入適量的dUTP，以dUTP替代dTTP摻入DNA中，形成含dU堿基的PCR擴增產物；后續進行PCR反應時，使用UDG酶選擇性切割可能被污染而帶入的之前PCR擴增產生的含有dU的單鏈或雙鏈DNA，從而避免之前的PCR擴增產物可能的污染對于本次PCR擴增帶來的負面影響。
本產品為熱敏型，在50℃孵育10分鐘可以迅速不可逆滅活。在PCR或RT-PCR反應前，PCR或RT-PCR體系中加入Heat-labile Bacterium UDG室溫處理10min，即可充分消除可能的之前的含有dUTP的PCR擴增產物的污染。本產品不僅適用于PCR，也適用于qPCR、RT-PCR和qRT-PCR等體系。
活性定義：One unit is defined as the amount of enzyme that catalyzes the release of 60 pmol of uracil per minute from double-stranded, uracilcontaining DNA. Activity is measured by release of [3H]-uracil in a 50 μl Standard?Taq?Reaction Buffer containing 0.2 μg DNA (104–105?cpm/μg) in 30 minutes at 37℃.
Heat-labile Bacterial UDG酶活性鑒定結果可參考圖1。
圖1.Heat-labile Bacterial UDG催化酶解5μl含dU堿基的PCR擴增產物效果圖。使用本產品或國外N公司的酶，在20μl體系，分別以5μl含dU堿基的PCR擴增1500bp PCR產物為底物和不同量的(0U, 0.0313U, 0.0625U, 0.125U, 0.25U, 0.5U) Heat-labile Bacterial UDG，在1X Heat-labile Bacterial UDG Buffer，37℃孵育30min，然后進行1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。如圖所示，本產品與N公司相比，具有相當的酶活。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。
Heat-labile Bacterial UDG經滅活處理后酶活鑒定結果可參考圖2。
圖2.Heat-labile Bacterial UDG以及E. coli?UDG (D7360)經50℃10min處理后，催化酶解5μl含dU堿基的PCR擴增產物效果圖。將不同量的E. coli?UDG (0U, 0.005U, 0.01U, 0.025U)和不同量的Heat-labile Bacterial UDG (0U, 0.0625U, 0.125U, 0.25U)經50℃處理10min之后，在20μl體系，分別以5μl含dU堿基的PCR擴增1500bp PCR產物為底物，在1X Heat-labile Bacterial UDG Buffer，37℃孵育30min，然后進行1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。如圖所示，E. coli?UDG 50℃處理10min之后酶活僅輕微下降，而Heat-labile Bacterial UDG均完全滅活。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。
來源：大腸桿菌重組、表達和純化而獲得。
純度：不含UDG酶活力之外的內切或外切脫氧核糖核酸酶、RNase和磷酸酶活性。
用途：去除單鏈或雙鏈DNA尿嘧啶堿基；去除含dU的PCR產物氣溶膠污染；在二代測序(NGS)應用中，主要用于mRNA定向測序文庫的構建；用于提高定向誘變方法的效率和用來獲得高度標記的寡核苷酸探針；用于PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR體系。
酶儲存溶液：20mM Tris-HCl (pH 7.5), 50mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% (v/v) glycerol。
10X Heat-labile Bacterial UDG Buffer：100mM Tris-HCl, 500mM KCl, 15mM MgCl2, pH 8.3 at 25℃。
失活或抑制：50℃加熱10min可以使Heat-labile Bacterial UDG完全失活。
包裝清單：
| 產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
| D7362S-1 | Heat-labile Bacterial UDG (1U/μl) | 100μl |
| D7362S-2 | 10X Heat-labile Bacterial UDG Buffer | 500μl |
| — | 說明書 | 1份 |
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| 產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
| D7362M-1 | Heat-labile Bacterial UDG (1U/μl) | 500μl |
| D7362M-2 | 10X Heat-labile Bacterial UDG Buffer | 2.5ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，至少一年有效。
注意事項：
Heat-labile Bacterial UDG酶在大多數PCR或RT-PCR體系中均具有活性，但對于自行使用的PCR或RT-PCR體系，首次使用時建議先測試一下是否和所使用的體系兼容。通常取含dUTP的PCR擴增產物，參考圖1加入適量UDG，觀察能否有效降解含dUTP的PCR擴增產物。本產品會被高離子強度(>100mM)所抑制。
dNTP/dUTP推薦選購D7376 dNTP/dUTP Mixture (2.5mM each/5mM)。
Heat-labile Bacterial UDG酶對雙鏈DNA的活性低于對單鏈DNA的活性，對小的U-DNA寡核苷酸和dUMP有活性，但對RNA或正常的不含dUTP的DNA沒有活性。
Heat-labile Bacterial UDG酶活對于金屬離子沒有依賴性，在Mg2+或EDTA的存在情況下均具有活性。
由Heat-labile Bacterial UDG酶消化產生的DNA鏈的無堿基位點可通過加熱，堿處理或核酸內切核酸酶處理而除去。通常PCR反應過程中的加熱步驟可以確保UDG酶消化的位點被完全剪切開。
Heat-labile Bacterial UDG酶可以在PCR反應前清除不慎污染的含dUTP的PCR產物，從而避免由于污染導致的PCR假陽性結果。
如果需要將Heat-labile Bacterial UDG酶應用于One-Step RT-PCR或者One-Step qRT-PCR體系，需要選擇耐熱反轉錄酶，并需要將逆轉錄溫度設置為50-55℃。
本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1.按照常規反應體系設置PCR或RT-PCR反應體系，同時加入Heat-labile Bacterial UDG至最終濃度為0.02U/μl，混勻。通常僅加入PCR或RT-PCR的buffer即可，無需加入UDG的buffer。
2.25℃孵育5-10min (去除可能的含dUTP的PCR擴增產物的污染)，隨后進入PCR或RT-PCR程序。??
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