重組蛋白昆蟲表達服務-儀器資料-資訊-生物在線

重組蛋白昆蟲表達服務

作者:卡梅德生物科技(天津)有限公司 2018-09-18T00:00 (訪問量:9792)

卡梅德生物多年致力于重組蛋白表達,抗體制備研究,我們目前擁有大量的商業化表達載體質粒包括多種標簽質粒(His,GST,SUMO,FLAG等標簽)以及多種表達宿主細胞可選,以滿足每個客戶不同的重組蛋白制備要求。
重組蛋白表達服務 — 昆蟲桿狀病毒表達系統

昆蟲桿狀病毒表達系統屬于真核表達系統之一,具有外源基因表達水平高、易于表達異源多聚體蛋白、安全性高等特點,重組表達的蛋白產品具有正確的翻譯后修飾和生物學活性,如二硫鍵的形成、磷酸化、糖基化等等。同時昆蟲細胞懸浮培養模式有利于大規模表達重組蛋白,可達到10,000L級別??返律锟梢詾榭蛻籼峁┱椎牡鞍妆磉_方案,我們免費對客戶提供的基因進行序列分析測試,同時根據Sf9,Sf21,Hi-5及S2昆蟲細胞的密碼子偏愛性,免費為您進行密碼子優化,從而有效提高重組蛋白表達量。我們的團隊成員具有多年的重組蛋白和抗體的制備經驗,使得我們熟悉不同蛋白的表達特性,如膜蛋白表達,內源性蛋白表達以及分泌性蛋白表達,同時公司擁有的GMP/GLP 生產級實驗室和嚴謹的符合臨床注冊原則的文件記錄體系,能為您的蛋白產品保駕護航。

我們可供給您的昆蟲宿主細胞系:

細胞

來源

用途

Sf9

Sf9細胞系分離自IPLBSF21-AE

適于轉染、純化、生產高滴度病毒、鋪板以及表達重組蛋白

Sf21

Sf21細胞衍生于IPLBSF-21細胞系

轉染、純化、生產高滴度病毒、鋪板以及表達重組蛋白。Sf21細胞在一些結構表達方面優于Sf9細胞。

Hi5

Hi5細胞系源于白菜尺蠖卵巢細胞,粉紋夜蛾細胞

適用于重組病毒顆粒表達,也常用于轉染和空斑純化,且Hi5細胞系更適合來表達分泌型重組蛋白

S2

S2?是一種果蠅晚期胚胎細胞。其中多為雌性四倍體細胞,也有雙倍體細胞

比較適合病毒結構蛋白等重組表達

主要服務步驟:

客戶可提供具體的服務要求,或者由卡梅德生物全權制備重組蛋白

步驟

服務內容

時間

亞克隆

*密碼子優化,基因合成(無基因表達);客戶提供質粒:擴增并抽提含有目標基因的載體質粒

*拼接序列驗證:測序

*交付:正確構建的重組表達質粒及測序原始報告

2

病毒擴大化培養

*重組bacmid DNA擴大化培養,并轉染昆蟲細胞制備P1P2病毒stock

* P2病毒滴度測定(滴度108109),并驗證小量蛋白表達

*P3病毒制備(可選,最多可制備3L重組桿狀病毒)

交付:5-10 ml, >107?pfu/ml?病毒及實驗報告

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表達優化及測試

*P3病毒貯液轉染昆蟲細胞

-?不同的昆蟲細胞系

-?不同的表達時間

-?不同的感染復數(MOI

*SDS-PAGEWB分析

交付:圖片,實驗報告

1-2

大規模重組蛋白表達及純化

* 1L (默認),5L10L,30L,80L,130L250L任選

-?通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

*SDS-PAGEWB驗證蛋白表達

交付:重組蛋白1~5mg及純化報告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?/span>Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達90%以上。

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我們的服務優勢:

*密碼子優化:包含稀有密碼子分析,蛋白親水性分析和跨膜結構域的預測分析

*多種融合標簽載體和宿主,以保證高可溶蛋白表達和高蛋白活性

*多種規模蛋白發酵模式:小規模(500ml2.5L,10L30L)、大規模(80L,130L,250L500L發酵罐)

*短時間內制備高純度毫克級,克級重組蛋白

*低內毒素:LAL檢測法<0.1EU/ug

*完整的GMP文件支撐體系,保證所有材料、試劑和制備信息可追溯

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