?1.?通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小、細胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實驗需要，進行培養并給予0-10微升特定的藥物刺激。
2.?每孔加入10微升CCK-8溶液。如果起始的培養體積為200微升，則需加入20微升CCK-8溶液，其它情況以此類推?？梢杂眉恿讼鄳考毎囵B液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔心所使用的藥物會干擾檢測，需設置加了相應量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。
3.?在細胞培養箱內繼續孵育0.5-4小時，對于大多數情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續實驗。
4.?在450nm測定吸光度。如無450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片?？梢允褂么笥?00nm的波長，例如650nm，作為參考波長進行雙波長測定。
5.?將不同數量的HeLa細胞按照每孔100微升培養液接種到96孔板中，培養至細胞貼壁充分后，每孔加入10微升的CCK-8溶液孵育2小時后測定A450的檢測效果圖參考圖2。檢測效果僅供參考，實測數據會因檢測儀器等的不同而存在差異。
圖2. CCK-8試劑盒測定不同數量HeLa細胞的檢測效果圖。實測數據會因檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數據僅供參考。
常見問題：
1. CCK-8溶液對細胞的毒性大小如何？
CCK-8溶液對細胞的毒性非常低，通常觀察不到細胞毒性。細胞在CCK-8法檢測后仍然可以正常生長，并可以用于其它的細胞實驗。但為了避免CCK-8溶液可能帶來的對于后續檢測的影響，除非該細胞極難獲得，否則不推薦把CCK-8溶液孵育過的細胞用于其它實驗。
2.如果吸光度值太低，可以采取什么辦法？
a.適當增加細胞數量。
b.延長加入CCK-8溶液后的孵育時間。