一般來講，細(xì)胞轉(zhuǎn)移最有效的方法是進(jìn)行低溫保存（-70℃~-196℃），而細(xì)胞超低溫保存的基本原理是：當(dāng)細(xì)胞處于-70℃以下環(huán)境時，細(xì)胞內(nèi)的酶活性均已停止，即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài)，故而可以長期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵，在于通過0~-20℃階段的程序降溫，在此溫度范圍內(nèi)，冰晶呈針狀，極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。
經(jīng)過研究人員的長期試驗，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇基本原則是慢凍速融，這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。
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材料準(zhǔn)備
1、儀器：凈化工作臺、離心機、恒溫水浴箱、冰箱（4℃、-20℃、-70℃）、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱、液氮冰箱。
2、玻璃器皿：吸管（彎頭、直頭）、培養(yǎng)瓶、玻璃瓶（250ml、100ml）、廢液缸。
3、塑料器皿：吸頭、槍頭、膠塞、移液管（10ml）、15ml離心管、凍存管（1~2ml）。
4、其他物品：微量加樣槍、紅血球計數(shù)板、記號筆、醫(yī)用橡皮膏、移液槍。
5、PBS,胎牛血清，DMSO，培養(yǎng)液，雙抗，胰蛋白酶（0.25%）。
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細(xì)胞凍存
目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由冰晶形成的細(xì)胞損傷。
1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌種保存很少用于細(xì)胞凍存。
2、取對數(shù)生長期的細(xì)胞，用胰蛋白酶把單層生長的細(xì)胞消化下來，懸浮生長的細(xì)胞則直接將細(xì)胞移至15ml離心管中。
3、離心1000 rpm,5 min。
4、去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5x10^6/ml~1x10^7/ml。
5、 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時間及操作者。
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6、凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min；當(dāng)溫度達(dá)到-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。
細(xì)胞復(fù)蘇
1、從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。
2、從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細(xì)胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混勻。
3、離心，1000 rpm，5 min。
4、棄去上層清液，加入含10%胎牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
5、次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
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注意要點
1、冷凍越慢越好，復(fù)蘇越快越好。
2、與液氮接觸的操作，注意戴保護(hù)眼鏡和手套。細(xì)胞復(fù)蘇時，水浴中搖動小瓶易爆炸。且DMSO為有毒致癌品，接觸時帶好手套。
3、凍存細(xì)胞數(shù)量要足夠，一般最低要達(dá)到5x10^6/ml。濃度視情況而定。
4、做好標(biāo)記：培養(yǎng)瓶上應(yīng)該用馬克筆做好標(biāo)記，寫上細(xì)胞名稱、代數(shù)和凍存時間。
5、對剛復(fù)蘇的細(xì)胞動作要輕柔，避免細(xì)胞破裂。
6、DMSO對大多數(shù)細(xì)胞不敏感，所以解凍之后不需要除去DMSO，解凍后頻繁換液會慢慢除去DMSO。部分對DMSO敏感的細(xì)胞需要除去DMSO。
7、解凍后的細(xì)胞要用和以前一樣的培養(yǎng)液和血清，突然換不一樣的培養(yǎng)液和血清會造成細(xì)胞生長不良，甚至死亡。