一、試劑盒說明?

? WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，在電子耦合試劑1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成橙黃色水溶性的甲月贊。WST-8被細胞內脫氫酶生物還原后生成的甲月贊能夠溶解在組織培養基中，生成的甲月贊量與活細胞數量成正比。

CCK-8法是用于測定細胞增殖或毒性試驗中活細胞數目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。實驗的靈敏度比其它四唑鹽如MTT, XTT, MTS或WST -1高。由于CCK-8溶液相當穩定，并且對細胞沒有毒性，可直接加入到細胞樣品中長時間孵育。

二、試劑盒組份

三、試劑盒以外自備儀器和試劑

低速離心機 、酶標儀（450nm波長）、平板搖床、微量移液器、96孔板

四、 注意事項

1. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會干擾檢測，需設法去除。

2. 如果待測溶液有還原性，測定不含細胞，但含有CCK-8的待測溶液在450 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的100 μl培養基和10 μl CCK-8進行檢測。

3. 用酶標儀檢測前請確?？變葲]有氣泡，否則會干擾測定。

4. 為保證您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

五、 操作方法

1. 96孔板加入細胞100μL/孔（約1×10⁴），置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時。

2.加入適當濃度的受試化合物。

3.將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4.?向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液。

5.?37℃下孵育1～4小時。

6.?酶標儀在450nm波長處檢測每孔的光密度。

7.結果分析?

(1) 細胞的存活率：將各測試孔的OD值減去本底OD值（完全培養基加CCK-8，無細胞）或空白藥物孔OD值（完全培養基加受試藥物的不同稀釋度加CCK-8，無細胞），各重復孔的OD值取均數±SD。

細胞的存活率以T/C%表示，T為加藥細胞的OD值，C為對照細胞的OD值。

細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

??????? (2) 求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC₅₀)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC₉₀)。

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