1?目的：為保證Alliance?2695型高效液相色譜儀的正確使用，建立Alliance?2695型高效液相色譜儀標準操作規程。

2?范圍：適用于Alliance?2695型高效液相色譜儀操作的全部行為。?

3?責任：中心化驗室對本SOP的實施全面負責。?

4?內容：?

4．1?開機?

4．1．1接通儀器插座電源開關。?

4．1．2?先打開2695主機的電源開關，再打開2996檢測器的電源開關。?

4．1．3待2695主機與2996檢測器自檢完畢后，打開電腦顯示器、電腦主機電源開關，計算機開始自檢進入Windows?2000桌面。?

4．1．4在電腦屏幕上用鼠標雙擊Millennium32（M32）圖標。進入Waters高壓液相操作系統主窗口。成都雅源科技專業提供國產實驗設備，進口實驗設備（島津、安捷倫等）主要產品：氣相色譜儀、液相色譜儀、色譜柱、氣相色譜柱、液相色譜柱、樣品瓶、標準品、凈化工作臺、旋光儀、熔點儀、色譜純試劑、純水機、酒色譜、柱溫箱、水分測定儀、分析天平、紫外可見分光光度計、離心機、旋轉蒸發儀、超聲波清洗機、定氮儀、氮吹儀、折光儀、酸度計、電導率儀、農殘速測儀、生物安全柜、恒溫濕箱、真空干燥箱、藥物穩定性試驗箱、培養箱、干燥箱、馬弗爐、原子吸收等。

4．1．5單擊M32主窗口上“Login”鍵，當出現User?name提示時，輸入使用者代號，在Password提示里輸入此代號對應密碼?。再按回車鍵即可激活Millennium32操作窗口。?

4．2?硬件操作?

4．2．1溶劑脫氣?

先打開氦氣瓶氣體閥門，將分壓表調至0．5MPa；按“Menu/Status”鍵，進入“Status(1)”界面，用“↑”、“↓”、“←”、“→”鍵在界面上?“Sparge”項中，選擇A、B、C或D中所選用的溶劑流路號進行脫氣處理（如選用A、B兩瓶溶劑，則選擇A-100%，B-100%，按“Enter”鍵開始脫氣），脫氣15～20分鐘后，可將脫氣量由100%降為30%。?

4．2．2干灌注?

如長時間未用機器溶劑管理系統流路是干的或系統中有空氣存在時，需先做抽氣灌注處理。?

4．2．2．1輕輕振蕩溶劑瓶中的過濾頭以除去可能存留的氣泡；?

4．2．2．2打開溶劑輸送單元進入門，在灌注排液閥出口插上一支注射器，然后打開排液閥（逆時針旋轉半圈），不要將注射器固定在排液閥上，而要用手將其緊貼排液閥的出口；?

4．2．2．3按界面右下角“Direct?Function”鍵進入子菜單，選擇“Dry?prime”項，按“Enter”鍵，在“duration”項中輸入一數值（從5起），按屏幕上所需做灌注的流路號A、B、C或D鍵；?

4．2．2．4按“Continue”鍵，用一只手握住注射器，同時另一只手抽注射器的桿，使針筒中產生一段使流路中空氣逸出所必需的真空；?

4．2．2．5重復此操作直至排液口有溶劑流出。（這可能需要幾分鐘時間，特別是當在線脫氣機也同時在灌注時，時間會更長。）?

4．2．2．6此流路灌注完畢后，重復上述操作將4個溶劑通道都充滿溶劑，然后關閉排液閥。按“Cancel”鍵退出“Dry?prime”程序。?

4．2．3?濕灌注?成都雅源科技專業提供國產實驗設備，進口實驗設備（島津、安捷倫等）主要產品：氣相色譜儀、液相色譜儀、色譜柱、氣相色譜柱、液相色譜柱、樣品瓶、標準品、凈化工作臺、旋光儀、熔點儀、色譜純試劑、純水機、酒色譜、柱溫箱、水分測定儀、分析天平、紫外可見分光光度計、離心機、旋轉蒸發儀、超聲波清洗機、定氮儀、氮吹儀、折光儀、酸度計、電導率儀、農殘速測儀、生物安全柜、恒溫濕箱、真空干燥箱、藥物穩定性試驗箱、培養箱、干燥箱、馬弗爐、原子吸收等。在Status(1)界面上Composition項中A、B、C或D中選擇所需濕洗處理的溶劑流路號，輸入100%。（若選用兩種以上溶劑，則按實際流動相溶劑配比分別輸入各自百分比。如A-60%,B-40%）按界面右下角“Direct?Function”鍵，在Direct?Functions子菜單中選擇“Wet?prime”項，按“Enter”鍵,用箭頭和數字鍵編輯流速及時間參數，按“OK”鍵，機器開始濕灌注操作。重復上述操作，直至所有需用溶劑流路均濕灌注完畢。按“Cancel”鍵退出“Wet?prime”程序。?

4．2．4沖洗進樣器?

按界面右下角“Direct?Function”鍵，在Direct?Functions子菜單中選擇“Purge?Injector”項，按“Enter”鍵,?用箭頭和數字鍵編輯相關參數，按“OK”鍵，機器開始沖洗進樣器。完畢后按“Cancel”鍵退出“Purge?Injector”程序。?（生物秀儀器頻道?www.bbioo.com）

4．2．5清洗進樣針?

按“Menu/status”鍵切換到開機主界面，按“Diag”鍵，在診斷界面中按“Prime?NdlWsh”鍵，按“Start”鍵，開始清洗進樣針。完畢后按“Cancel”鍵退出“Prime?NdlWsh”程序。?

4．2．6流路排氣?

在診斷界面中按“Prime?SealWsh”鍵，按“Start”鍵，清洗液開始灌注流路排出氣泡。肉眼觀察流路中沒有氣泡后，按“Halt”鍵停止灌注，按“Close”鍵退出“Prime?SealWsh”程序。?

按“Exit”鍵退出診斷界面，“Menu/Status”回到“Status(1)”界面。?

4．3?軟件操作
4．3．1?建立方法
4．3．1．1?進入Project窗口
在M32主窗口選項中選擇所需的project，然后將Browse?project打開，再按ok即可進入project窗口。
4．3．1．2?建立儀器方法
選擇file，點New?method，再點Instrument?Method儀器自檢后即可出現Instrument
Method?Editor窗口，選擇2695以及2996的有關項目，填好后選file，點save?as輸入儀器方法，按save，然后按Exit退出。
4．3．1．3?建立數據處理方法
選file,點processing?Method即可出現processing?Method?Editor窗口，然后根據自己的要求在有關項目上填寫，填好后選file，選Save?as，輸入處理方法名稱后選Save，最后選Exit退出。
4．3．1．4?建立報告方法
選file，選Reporting?Method即可出現Report?publisher窗口，然后根據需要選擇Chromatograms、Sample?information以及result?table，最后選save?as，輸入報告方法名稱后選Exit退出。
4．3．1．5?建立儀器方法組
選擇file，點New?Method，再點Method?Set即可出現Method?Set?Edit的窗口，在Instrument?Method空白處選剛建立的儀器方法；在Default?processing?Method處選擇剛建立的數據處理方法；在Default?Report?Method處選剛建立的報告方法，然后再選file，選Save?as，輸入儀器方法組名稱，按Save，最后選Exit退出成都雅源科技專業提供國產實驗設備，進口實驗設備（島津、安捷倫等）主要產品：氣相色譜儀、液相色譜儀、色譜柱、氣相色譜柱、液相色譜柱、樣品瓶、標準品、凈化工作臺、旋光儀、熔點儀、色譜純試劑、純水機、酒色譜、柱溫箱、水分測定儀、分析天平、紫外可見分光光度計、離心機、旋轉蒸發儀、超聲波清洗機、定氮儀、氮吹儀、折光儀、酸度計、電導率儀、農殘速測儀、生物安全柜、恒溫濕箱、真空干燥箱、藥物穩定性試驗箱、培養箱、干燥箱、馬弗爐、原子吸收等。
4．3．2?進樣
在Millennium32主窗口上選Run?Samples，儀器即行自檢后進入Quick?set窗口，點擊流速圖標，在所用流動相流路號A、B、C或D項中輸入所占百分比，并輸入流速和其他參數，點擊“OK”鍵，開始平衡系統（此步前應先用過濾水充分沖洗分析柱）。在Instrument?Method處選自己需要的儀器方法，然后選Samples，填寫Sample?Name、?Function、?Method?set、?Vial、injection以及Run?time，最后按Monitor按鈕監測基線，等基線平穩后即可進樣。
4．3．3?數據處理與分析
進樣結束后回到project窗口進行數據處理與分析，點channel，選擇所需要的sample?Name、選擇review進入review窗口后即可處理與分析數據。
4．3．4?打印結果
先回到project窗口，然后打開打印機，準備好后點result處，選擇所要打印的Sample?Name，再點print按鈕，出現打印窗口，選擇ok即可。
4．4?關機
先將分析柱用過濾水沖洗充分，然后用過濾水沖洗進樣器和進樣針各3次，在將系統用甲醇或乙*等適當溶劑保護。最后將流速分階段調至0，再將M32軟件分窗口全部關掉，按主窗口上“Logout”推出M32操作系統?；氐絎indows?2000窗口，退出Windows?2000后，關掉主機電源開關，再關掉顯示器，然后按順序關掉2996，2695電源開關。
4．5?維護與保養
4．5．1分析柱每次用前先用過濾水沖洗3～4個柱體積，再用流動相平衡；用后也要用過濾水沖洗2～3個柱體積，再用無水甲醇或無水乙*保護。
4．5．2?打開控制泵后，要注意A、B、C、D四閥門是否停留在自己所需要的位置，各管吸頭是否浸沒在流動相液面下。
4．5．3啟動泵之前，千萬要注意先抽濾，使流動相充滿所需要的各管，然后再調節流速。
4．5．4隨時注意壓力變化情況，如果壓力變化較大，則說明有氣泡進入了分析柱要及時排掉，否則影響分析結果。
4．5．5?檢測器暫不用時要將紫外燈關掉，以延長其使用壽命。
4．5．6?關機前要用過濾水沖洗進樣器和進樣針各3次。以免殘余物質腐蝕機器，影響下一次使用。

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