什么是細胞活性?學習4種常見檢測方法-技術前沿-資訊-生物在線

什么是細胞活性?學習4種常見檢測方法

作者:Cell Signaling Technology(CST) 2020-07-19T12:22 (訪問量:10898)

實驗細胞保持正常狀態是實驗成功的基石。您在蛋白表達敲低、藥物處理或特殊培養細胞之后,是否有過第一次實驗結果令您特別興奮、卻在之后的重復實驗中發現了偏差而令您的心情一落千丈的經歷?這是這跟您樣本中死亡細胞的水平有關。這也是我們今天想要說的一個話題——定期檢測細胞活性,隨時關注細胞狀態。即便這組數據不是您課題中所必須的,但它卻是您控制實驗的有效手段。




細胞活性是指樣本群體中健康細胞所占的比例。
細胞活性的檢測對于觀察實驗過程中細胞的生理狀態是必須的。細胞活性會受環境因素影響,包括細胞培養各參數的改變、藥物和生長因子的刺激以及在各種疾病下作出的反應。例如,癌細胞表現出細胞活性加強,進而引起細胞異常增殖及逃避細胞凋亡,與之相反的是,神經退行性和其他組織退行性疾病則以進行性細胞丟失為特征。損傷和感染也會對細胞存活產生負面影響,導致壞死或凋亡。以上,細胞本身的健康與疾病之間的關系案例,警示我們在不同實驗背景和模型系統中測量細胞活性十分必要。

科學家們已經開發了用于不同實驗平臺的多種檢測細胞活性的技術。具體來說,細胞檢測可以根據檢測原理進行分組,包括細胞增殖、質膜完整性、代謝活性和線粒體功能。我們除了通過活性檢測快速查看細胞群體的總體健康狀況,還可以達到更深層的需求,就是通過它來確定活性受損時細胞的死亡方式 - 細胞凋亡還是壞死。

XTT 檢測(XTT Cell Viability Kit #9095)是一種可用于檢測細胞活性的代謝性檢測方法。在健康細胞中,XTT 通過線粒體酶轉換成橙色的甲瓚染料。接著通過檢測 450 nm 處的相對吸光度來估計活細胞數量。這種方法的優點之一是操作簡單, 不需要細胞固定、通透或二次檢測方法,并且能夠在分析后還能繼續檢查細胞。

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代謝檢測的第二個方式是 刃天青檢測(Resazurin Cell Viability Kit #11884)。將刃天青試劑添加到細胞培養物中,在健康細胞中,刃天青試劑通過脫氫酶還原成為熒光試鹵靈,最終試鹵靈的量與樣品中的活細胞成比例。與 XTT 檢測類似,刃天青檢測中使用的細胞也可以繼續用于下游分析。
活/死細胞計數檢測是評估細胞活性的另一種常用方法。這一類的檢測使用細胞通透性活體染料、細胞不通透染料或兩者的組合,同時標記細胞群體中的活細胞和死細胞。例如,臺盼藍是一種偶氮染料,無法穿透細胞膜,因此不會進入健康細胞。但是,發生膜損壞的死亡細胞會吸收臺盼藍,所以最終能夠使用血細胞計數器計數死亡(藍色)和存活(無色)細胞的數量。
另外,免疫組織化學法 (IHC) 也可以檢測細胞活性。這種方法通常用于觀察在健康與病變組織中靶蛋白的分布及表達模式,同時在保持組織切片的完整細胞架構的情況下確定發生細胞死亡的區域。通過使用細胞增殖(包括 Ki67PCNA)或凋亡(包括裂解的 Caspase-3 PARP)的標記物進行定量分析。
評估細胞活性的方法有很多,您最常做哪一種呢?歡迎留言到評論區,以便大家交流學習。
另外,在細胞實驗中,如上文所提,細胞的狀態十分重要,要保證實驗結果的一致性,可以通過監測細胞活性保證細胞的健康狀態,趁此機會,小編還要提醒您細胞實驗中另一個關鍵問題,點擊閱讀>>>


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