實(shí)驗(yàn)細(xì)胞保持正常狀態(tài)是實(shí)驗(yàn)成功的基石。您在蛋白表達(dá)敲低、藥物處理或特殊培養(yǎng)細(xì)胞之后,是否有過第一次實(shí)驗(yàn)結(jié)果令您特別興奮、卻在之后的重復(fù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)了偏差而令您的心情一落千丈的經(jīng)歷?這是這跟您樣本中死亡細(xì)胞的水平有關(guān)。這也是我們今天想要說的一個(gè)話題——定期檢測(cè)細(xì)胞活性,隨時(shí)關(guān)注細(xì)胞狀態(tài)。即便這組數(shù)據(jù)不是您課題中所必須的,但它卻是您控制實(shí)驗(yàn)的有效手段。

細(xì)胞活性是指樣本群體中健康細(xì)胞所占的比例。細(xì)胞活性的檢測(cè)對(duì)于觀察實(shí)驗(yàn)過程中細(xì)胞的生理狀態(tài)是必須的。細(xì)胞活性會(huì)受環(huán)境因素影響,包括細(xì)胞培養(yǎng)各參數(shù)的改變、藥物和生長(zhǎng)因子的刺激以及在各種疾病下作出的反應(yīng)。例如,癌細(xì)胞表現(xiàn)出細(xì)胞活性加強(qiáng),進(jìn)而引起細(xì)胞異常增殖及逃避細(xì)胞凋亡,與之相反的是,神經(jīng)退行性和其他組織退行性疾病則以進(jìn)行性細(xì)胞丟失為特征。損傷和感染也會(huì)對(duì)細(xì)胞存活產(chǎn)生負(fù)面影響,導(dǎo)致壞死或凋亡。以上,細(xì)胞本身的健康與疾病之間的關(guān)系案例,警示我們?cè)诓煌瑢?shí)驗(yàn)背景和模型系統(tǒng)中測(cè)量細(xì)胞活性十分必要。
科學(xué)家們已經(jīng)開發(fā)了用于不同實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的多種檢測(cè)細(xì)胞活性的技術(shù)。具體來說,細(xì)胞檢測(cè)可以根據(jù)檢測(cè)原理進(jìn)行分組,包括細(xì)胞增殖、質(zhì)膜完整性、代謝活性和線粒體功能。我們除了通過活性檢測(cè)快速查看細(xì)胞群體的總體健康狀況,還可以達(dá)到更深層的需求,就是通過它來確定活性受損時(shí)細(xì)胞的死亡方式 - 細(xì)胞凋亡還是壞死。
XTT 檢測(cè)(XTT Cell Viability Kit #9095)是一種可用于檢測(cè)細(xì)胞活性的代謝性檢測(cè)方法。在健康細(xì)胞中,XTT 通過線粒體酶轉(zhuǎn)換成橙色的甲瓚染料。接著通過檢測(cè) 450 nm 處的相對(duì)吸光度來估計(jì)活細(xì)胞數(shù)量。這種方法的優(yōu)點(diǎn)之一是操作簡(jiǎn)單, 不需要細(xì)胞固定、通透或二次檢測(cè)方法,并且能夠在分析后還能繼續(xù)檢查細(xì)胞。
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