什么是細(xì)胞活性?學(xué)習(xí)4種常見檢測(cè)方法-技術(shù)前沿-資訊-生物在線

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什么是細(xì)胞活性?學(xué)習(xí)4種常見檢測(cè)方法

作者:Cell Signaling Technology(CST) 2020-07-19T12:22 (訪問量:12222)

實(shí)驗(yàn)細(xì)胞保持正常狀態(tài)是實(shí)驗(yàn)成功的基石。您在蛋白表達(dá)敲低、藥物處理或特殊培養(yǎng)細(xì)胞之后,是否有過第一次實(shí)驗(yàn)結(jié)果令您特別興奮、卻在之后的重復(fù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)了偏差而令您的心情一落千丈的經(jīng)歷?這是這跟您樣本中死亡細(xì)胞的水平有關(guān)。這也是我們今天想要說的一個(gè)話題——定期檢測(cè)細(xì)胞活性,隨時(shí)關(guān)注細(xì)胞狀態(tài)。即便這組數(shù)據(jù)不是您課題中所必須的,但它卻是您控制實(shí)驗(yàn)的有效手段。




細(xì)胞活性是指樣本群體中健康細(xì)胞所占的比例。
細(xì)胞活性的檢測(cè)對(duì)于觀察實(shí)驗(yàn)過程中細(xì)胞的生理狀態(tài)是必須的。細(xì)胞活性會(huì)受環(huán)境因素影響,包括細(xì)胞培養(yǎng)各參數(shù)的改變、藥物和生長(zhǎng)因子的刺激以及在各種疾病下作出的反應(yīng)。例如,癌細(xì)胞表現(xiàn)出細(xì)胞活性加強(qiáng),進(jìn)而引起細(xì)胞異常增殖及逃避細(xì)胞凋亡,與之相反的是,神經(jīng)退行性和其他組織退行性疾病則以進(jìn)行性細(xì)胞丟失為特征。損傷和感染也會(huì)對(duì)細(xì)胞存活產(chǎn)生負(fù)面影響,導(dǎo)致壞死或凋亡。以上,細(xì)胞本身的健康與疾病之間的關(guān)系案例,警示我們?cè)诓煌瑢?shí)驗(yàn)背景和模型系統(tǒng)中測(cè)量細(xì)胞活性十分必要。

科學(xué)家們已經(jīng)開發(fā)了用于不同實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的多種檢測(cè)細(xì)胞活性的技術(shù)。具體來說,細(xì)胞檢測(cè)可以根據(jù)檢測(cè)原理進(jìn)行分組,包括細(xì)胞增殖、質(zhì)膜完整性、代謝活性和線粒體功能。我們除了通過活性檢測(cè)快速查看細(xì)胞群體的總體健康狀況,還可以達(dá)到更深層的需求,就是通過它來確定活性受損時(shí)細(xì)胞的死亡方式 - 細(xì)胞凋亡還是壞死。

XTT 檢測(cè)(XTT Cell Viability Kit #9095)是一種可用于檢測(cè)細(xì)胞活性的代謝性檢測(cè)方法。在健康細(xì)胞中,XTT 通過線粒體酶轉(zhuǎn)換成橙色的甲瓚染料。接著通過檢測(cè) 450 nm 處的相對(duì)吸光度來估計(jì)活細(xì)胞數(shù)量。這種方法的優(yōu)點(diǎn)之一是操作簡(jiǎn)單, 不需要細(xì)胞固定、通透或二次檢測(cè)方法,并且能夠在分析后還能繼續(xù)檢查細(xì)胞。

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代謝檢測(cè)的第二個(gè)方式是 刃天青檢測(cè)(Resazurin Cell Viability Kit #11884)。將刃天青試劑添加到細(xì)胞培養(yǎng)物中,在健康細(xì)胞中,刃天青試劑通過脫氫酶還原成為熒光試鹵靈,最終試鹵靈的量與樣品中的活細(xì)胞成比例。與 XTT 檢測(cè)類似,刃天青檢測(cè)中使用的細(xì)胞也可以繼續(xù)用于下游分析。
活/死細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)是評(píng)估細(xì)胞活性的另一種常用方法。這一類的檢測(cè)使用細(xì)胞通透性活體染料、細(xì)胞不通透染料或兩者的組合,同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞群體中的活細(xì)胞和死細(xì)胞。例如,臺(tái)盼藍(lán)是一種偶氮染料,無法穿透細(xì)胞膜,因此不會(huì)進(jìn)入健康細(xì)胞。但是,發(fā)生膜損壞的死亡細(xì)胞會(huì)吸收臺(tái)盼藍(lán),所以最終能夠使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)死亡(藍(lán)色)和存活(無色)細(xì)胞的數(shù)量。
另外,免疫組織化學(xué)法 (IHC) 也可以檢測(cè)細(xì)胞活性。這種方法通常用于觀察在健康與病變組織中靶蛋白的分布及表達(dá)模式,同時(shí)在保持組織切片的完整細(xì)胞架構(gòu)的情況下確定發(fā)生細(xì)胞死亡的區(qū)域。通過使用細(xì)胞增殖(包括 Ki67PCNA)或凋亡(包括裂解的 Caspase-3 PARP)的標(biāo)記物進(jìn)行定量分析。
評(píng)估細(xì)胞活性的方法有很多,您最常做哪一種呢?歡迎留言到評(píng)論區(qū),以便大家交流學(xué)習(xí)。
另外,在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,如上文所提,細(xì)胞的狀態(tài)十分重要,要保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性,可以通過監(jiān)測(cè)細(xì)胞活性保證細(xì)胞的健康狀態(tài),趁此機(jī)會(huì),小編還要提醒您細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中另一個(gè)關(guān)鍵問題,點(diǎn)擊閱讀>>>


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