瓊脂糖凝膠4FF

?

?

?

產品簡介：

瓊脂糖凝膠4FF是在瓊脂糖凝膠4B的基礎上經過兩次交聯形成的高交聯基質，微球的化學穩定性及物理性能顯著增強，剛性增加，流速更快，使產品處理時間大大縮短。可用于生物大分子的凝膠層析。

1.?外觀

本品為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質。

2.?理化指標

*檢測條件：?層析柱10mm×300mm ?*柱床高15cm,25℃, 流動相為0.1mol/LNaCl

3.?貯存

產品應密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20% 乙醇），通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

4.?注意事項

本品應避免與氧化劑接觸，避免長時間暴露在空氣中。運輸中應避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。

5.?應用

本產品具有很高的化學穩定性、高流速、較好的機械性能、可多次重復使用等特點，非特異性吸附低，回收率高，可用有機溶劑及1~2mol/L 的NaOH在位清洗，適用于工業規模生產，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質、核酸及多肽的凝膠色譜純化。

5.1?裝柱

凝膠過濾介質的使用對裝柱的要求較高，為了保證分離效果，一般通過柱子上加一個裝柱器來使分離柱裝滿凝膠，或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進行檢驗。以下過程為通用介質裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子，可在柱床穩定后將柱床壓緊，接好管路。

（1）讓所有的材料和試劑達到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。

（2）選擇一根一定直徑的柱子，長約30~60cm,根據柱子大小取所需量的凝膠（約為柱床體積的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。

（3）將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務必使底端無氣泡。

（4）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。

（5）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩定。用緩沖液平衡柱子，到柱床穩定。

（6）最好用一個裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平，上好柱頭。

5.2?平衡

讓緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。

5.3?上樣

（1）樣品用緩沖液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理，再上樣。

（2）介質對樣品組分的分離是按組分分子量大小進行的，分子量大的先流出來。

（3）上樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離越好。

5.4?洗脫

用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

5.5?再生

一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。

5.6?注意

在裝柱、使用和保存柱子的時候，始終要避免柱子流干氣泡進入。若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

5.7?在位清洗

（1）對于以離子鍵結合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。

（2）對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類，可用1M NaOH 去除。

（3）對強疏水性結合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產生氣泡。

清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。

5.8?注意

在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干氣泡進入。

5.9?去熱源

用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時?；蛴靡韵路椒ú襟E去除：

（1）2倍柱體積的70%乙醇；

（2）2倍柱體積50mM Tris-HCl pH7.5；

（3）1倍柱體積4M尿素；

（4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl；

以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

5.10?消毒

用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

注意：上樣之前，樣品必須去除色素，否則色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。

?