1.什么是酵母展示平臺
酵母展示（或酵母表面展示）是一種強大的蛋白質工程技術，它是用整合到酵母細胞壁中的重組蛋白的表達來分離和工程化抗體。自 2000 年首次發表以來，酵母表面展示已被廣泛用于設計各種蛋白質以提高親和力、特異性、表達、穩定性和催化活性。
2.酵母展示原理
酵母抗體展示技術（Yeast Display Technology）是指用抗體序列可變區與凝集素Aga2p融合表達，Aga2p蛋白亞基通過兩個二硫鍵與固定在酵母細胞壁上的Aga1p 蛋白亞基結合，結合流式分選技術，將靶向抗原的特異性抗體給篩選出來。
圖1：酵母文庫展示示意圖
3.納米抗體
納米抗體（Nanobody, Nbs）是駝科動物外周血清產生的一種單鏈抗體，這些抗體僅由重鏈組成，缺乏輕鏈和功能性CH1和CH4結構域。VHH晶體為2.5nm，長4nm，分子量只有15KDa。相較于傳統抗體，納米抗體因其分子量小，從而更容易可穿透血腦屏障；原核或真核系統有高表達量；特異性強，親和力高；對人的免疫原性弱等優點，因此在抗腫瘤藥物研發、心腦血管疾病、免疫疾病等領域有巨大價值。
圖2：納米抗體的3D結構
4.納米抗體酵母展示優缺點
4.1優點
（1）酵母作為真核表達系統，可以進行翻譯后修飾來表達和折疊復雜的真核蛋白；
（2）相對噬菌體展示文庫技術而言，酵母展示技術在微量抗體表達后抗體活性要高，得益此基礎，在流式篩選時就能區分抗體的親和力高低；
（3） 插入異源蛋白不會破壞表面蛋白的結構，也不會影響表面展示的效率。
4.2缺點
（1）相比于噬菌體展示技術，酵母展示庫容量較低，因此主要應用于客戶對項目庫容要求不高，動物免疫后PBMC細胞經過二次分選以及避免漏掉二硫鍵形成的抗體發現項目；
（2）由于酵母表面存在多個蛋白質拷貝，可能會發生與寡聚蛋白靶標不希望的多價結合。
5.酵母抗體展示應用
隨著這項技術的不斷完善，現在酵母展示的應用包括酶工程；蛋白質表位作圖、蛋白質-蛋白質相互作用的鑒定、免疫生物催化和生物傳感器，以及用于生物技術和生物醫學應用的酵母細胞上蛋白質和酶的展示。
6.泰克生物能夠提供酵母抗體展示技術服務
泰克生物能夠為客戶提供高質量的納米抗體酵母展示服務，主要服務流程如下：抗原準備，羊駝免疫，PBMC分離，RNA提取，cDNA制備，文庫構建，文庫篩選，抗體表達。
圖3：酵母抗體展示文庫流程圖
5.1抗原制備
5.1.1密碼子優化+基因模板合成+表達載體構建；
5.1.2質粒抽提+轉染（哺乳表達系統）目的蛋白檢測（WB，SDS-PAGE）；
5.1.3蛋白表達放大+蛋白親和純化。
5.2動物免疫
5.2.1動物免疫4次，加強免疫一針，共計免疫5針；
5.2.2免疫前采集陰性血清，第4針采血進行ELISA檢測血清效價；
5.2.3若第4針血清抗體效價（蛋白抗原>10^5；多肽抗原>10^4）滿足要求，則采血前7天再次加強免疫1針，如不滿足要求，則繼續常規免疫；
5.2.4效價合格，采血（＞100ml）分離單核細胞。
5.3 cDNA制備
5.3.1 PBMC總RNA提取（參照RNA提取試劑盒）；
5.3.2高保真RT-PCR制備cDNA（參照反轉錄試劑盒）。
5.4文庫制備
5.4.1以cDNA為模板，兩輪PCR擴增VHH基因；
5.4.2酵母表達質粒構建與轉化： VHH基因拼接酵母展示載體，電擊轉化酵母宿主菌，構建抗體庫，電擊次數不低于10次；
5.4.3鑒定：隨機挑選24個克隆，PCR鑒定陽性率+PCR鑒定多樣性+插入率。
圖4：VHH陽性率:>90%
5.5文庫篩選
5.5.1磁珠分選；
5.5.2 FACS分選（免疫雙標分選）；
5.5.3鋪板+陽性克隆菌培養+抗體基因測序；（>20個，多達96個）。
5.6抗體表達
5.6.1將獲得的抗體序列構建合適的表達載體（哺乳表達）進行表達+親和純化+抗體蛋白定量。