快速實現菌落總數計數的好方法-分析方法-資訊-生物在線

快速實現菌落總數計數的好方法

作者:北京五洲東方科技發展有限公司 2011-03-03T00:00 (訪問量:13574)

  螺旋接種是一種快速細菌接種方法。樣品依據阿基米德螺旋為接種軌跡,以一遞減的比率接種樣品。通過旋轉凸輪和轉板,可使液體達到對數式或其它方式接種。接種后,菌落分布在螺旋軌跡上,并隨半徑的增加分布得越來越分散。利用按接種法則進行計數的柵格,自平板外周向中央對平皿上的菌落進行計數,即可得到樣本中微生物的濃度。

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  螺旋接種方法得到了國內外專業機構的廣泛認可,該方法是美國FDA推薦的食品和化妝品中菌落計數的標準方法http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMethods/BacteriologicalAnalyticalManualBAM/UCM063346,同時也是APHA和AOAC推薦的標準方法。在國內,“中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準 SN/T 2098-2008中也推薦螺旋接種方法,作為菌落計數的標準方法,得到了廣大檢驗人員的肯定。
  螺旋接種的模式即遞減的比率不同,可應用于不同的領域:
  指數模式(接種量:50μl):在接種過程中,樣品量以指數模式遞減。在旋轉平板方法中用于菌落計數及單菌落分離。原始菌液濃度范圍:4.0 ×102-4.0 ×105Cfu/ml
  此接種方法不同于傳統的傾注式接種方法,省去了連續梯度稀釋的繁瑣步驟,可減少樣本檢測時培養皿、培養基等耗材3/4的使用數量,同時節省了實驗人員的大量時間,從而得到質檢、農檢和商檢等部門的廣泛認可。
  此模式也可用于螺旋梯度終點測試即SGE試驗中。利用spiral plater接種抗生素,形成徑向抗生素連續濃度梯度。將菌液沿徑向涂布于培養基上,可同時測試多個菌種??股貪舛扔蛇吘壷林行闹饾u增大,可對不同菌種形成不同的抑制作用,利用專業軟件可判斷此種抗生素對于該菌種的最低抑菌濃度MIC。
  慢指數模式(接種量:50μl)接種量、模式與指數模式相同,速度稍慢。使用濕的平板時,選擇緩慢指數模式,防止樣品在向心力的作用下外濺。
原始菌液濃度范圍:4.0 ×102-4.0 ×105 Cfu/ml
  比例模式(接種量:20μl)接種量與到中心的直線距離成比例遞減,接種物濃度的范圍因此比指數模式要窄得多。此接種模式有助于放大細菌數量在很小的梯度范圍內對抗生素或誘變劑的反應。
  均一模式(接種量:20μl):在旋轉過程中,樣品以恒定的速率接種。可用于艾姆斯試驗中接種沙門氏菌,研究兩種微生物的相互作用,利用較稀原始菌液獲得大量單菌落等。
  草坪模式(接種量:20μl)按照均一模式以恒定速率接種,但軌跡比均一模式密一倍,會在整個平板上產生均一、密集的生長。此接種模式用于在培養基上,均勻、精確的涂布樣品,如用于KB紙片藥敏測試或病毒空斑的研究。
  循環模式(接種量:50μl)模擬指數模式,但接種軌跡不是一條螺旋線,而是一系列圓圈,每組圓圈的接種濃度相同,主要是計數時更方便。
以上接種量均以90mm培養皿為準。
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  螺旋接種方法是一種快速、精確、均勻的接種方法,主要用于微生物計數、誘變分析、藥敏分析和單菌落分離。它能夠為實驗室節約耗材、降低成本,更重要的是節省精力和時間,結果較傳統平板法更精確、重復性更好。
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