MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)是一種非常經(jīng)典的細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒，被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè)。
MTT可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan(圖1A)。在特定溶劑存在的情況下，可以被完全溶解(圖1B)。然后通過酶標(biāo)儀可以測(cè)定570nm波長(zhǎng)附近的吸光度(圖2)。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。
圖1.MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒實(shí)測(cè)效果圖。A.HeLa細(xì)胞加入使用本試劑盒配制的MTT溶液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育4小時(shí)，顯微鏡下可見大量結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan生成。B.不同數(shù)量HeLa細(xì)胞在MTT溶液(MTT solution)加入后4小時(shí)的效果圖(上圖)及深紫色產(chǎn)物formazan生成后加入Formazan溶解液(Formazan solvent)，充分溶解后的效果圖(下圖)。
圖2. 本試劑盒檢測(cè)不同數(shù)量HeLa細(xì)胞的效果圖。不同的檢測(cè)條件下，實(shí)際讀數(shù)會(huì)因標(biāo)準(zhǔn)品的配制、檢測(cè)儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
本試劑盒采用了獨(dú)特的Formazan 溶解液配方，無需去除原有的培養(yǎng)液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。從而避免了由于去除培養(yǎng)液時(shí)formazan被部分去除而引起的誤差。
本試劑盒本底低，靈敏度高，線性范圍寬，使用方便。
碧云天各種細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒的比較和選擇，請(qǐng)參考 http://www.beyotime.com/cell-proliferation.htm。
本試劑盒C0009S包裝可以測(cè)定500個(gè)樣品，C0009M包裝可以測(cè)定2500個(gè)樣品。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| C0009S-1 | MTT | 25mg |
| C0009S-2 | MTT溶劑 | 5ml |
| C0009S-3 | Formazan溶解液 | 55ml |
| — | 說明書 | 1份 |
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| C0009M-1 | MTT | 125mg |
| C0009M-2 | MTT溶劑 | 25ml |
| C0009M-3 | Formazan溶解液 | 250ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
4℃或-20℃保存，MTT需避光保存，一年有效；MTT配制成溶液后需-20℃避光保存；Formazan溶解液也可以室溫保存。
注意事項(xiàng)：
由于使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一定要注意蒸發(fā)的問 題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面 ，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
MTT溶劑在低溫情況下會(huì)凝固，使用前請(qǐng)室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻 至全部融解后使用。
MTT配制成溶液后為黃色，需避光保存，長(zhǎng)時(shí)間光照會(huì)導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請(qǐng)勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解 后使用。
Formazan溶解液結(jié)凍或產(chǎn)生沉淀時(shí)可以室溫或37℃水浴孵育以促進(jìn)溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。
加入Formazan溶解液后請(qǐng)適當(dāng)輕輕混勻，但須注意避免產(chǎn)生泡沫。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. MTT溶液的配制：用5ml MTT溶劑溶解25mg MTT，配制成5mg/ml的MTT溶液。配制后即可使用，或直接-20℃避光保存，也可以根據(jù)需要適當(dāng)分裝后-20℃避光保存。
2. 通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予0-10微升特定的藥物刺激。
3. 每孔加入10微升MTT溶液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4小時(shí)。
4. 每孔加入100微升Formazan溶解液，適當(dāng)混勻，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)再繼續(xù)孵育。直至在普通光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)formazan全部溶解。通常37℃孵育3-4小時(shí)左右，紫色結(jié)晶會(huì)全部溶解。如果紫色結(jié)晶較小較少，溶解的時(shí)間會(huì)短一些。如果紫色結(jié)晶較大較多，溶解的時(shí)間會(huì)長(zhǎng)一些，此時(shí)為加速溶解可以適當(dāng)振搖數(shù)次。
5. 在570nm測(cè)定吸光度(可參考圖2)。如無570nm濾光片，可以使用560-600nm的濾光片。
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