MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)是一種非常經典的細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒，被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。

MTT可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成結晶狀的深紫色產物formazan(圖1A)。在特定溶劑存在的情況下，可以被完全溶解(圖1B)。然后通過酶標儀可以測定570nm波長附近的吸光度(圖2)。細胞增殖越多越快，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。

圖1.MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒實測效果圖。A.HeLa細胞加入使用本試劑盒配制的MTT溶液，在細胞培養箱內孵育4小時，顯微鏡下可見大量結晶狀的深紫色產物formazan生成。B.不同數量HeLa細胞在MTT溶液(MTT solution)加入后4小時的效果圖(上圖)及深紫色產物formazan生成后加入Formazan溶解液(Formazan solvent)，充分溶解后的效果圖(下圖)。

圖2. 本試劑盒檢測不同數量HeLa細胞的效果圖。不同的檢測條件下，實際讀數會因標準品的配制、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數據僅供參考。

本試劑盒采用了獨特的Formazan 溶解液配方，無需去除原有的培養液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。從而避免了由于去除培養液時formazan被部分去除而引起的誤差。
本試劑盒本底低，靈敏度高，線性范圍寬，使用方便。
碧云天各種細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒的比較和選擇，請參考 http://www.beyotime.com/cell-proliferation.htm。
本試劑盒C0009S包裝可以測定500個樣品，C0009M包裝可以測定2500個樣品。
包裝清單：

保存條件：
4℃或-20℃保存，MTT需避光保存，一年有效；MTT配制成溶液后需-20℃避光保存；Formazan溶解液也可以室溫保存。
注意事項：
由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養時間較長，一定要注意蒸發的問 題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養液；另一方面 ，可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方，以緩解蒸發。
MTT溶劑在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻 至全部融解后使用。
MTT配制成溶液后為黃色，需避光保存，長時間光照會導致失效。當顏色變為灰綠色時，請勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解 后使用。
Formazan溶解液結凍或產生沉淀時可以室溫或37℃水浴孵育以促進溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。
加入Formazan溶解液后請適當輕輕混勻，但須注意避免產生泡沫。
本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1. MTT溶液的配制：用5ml MTT溶劑溶解25mg MTT，配制成5mg/ml的MTT溶液。配制后即可使用，或直接-20℃避光保存，也可以根據需要適當分裝后-20℃避光保存。
2. 通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定)。按照實驗需要，進行培養并給予0-10微升特定的藥物刺激。
3. 每孔加入10微升MTT溶液，在細胞培養箱內繼續孵育4小時。
4. 每孔加入100微升Formazan溶解液，適當混勻，在細胞培養箱內再繼續孵育。直至在普通光學顯微鏡下觀察發現formazan全部溶解。通常37℃孵育3-4小時左右，紫色結晶會全部溶解。如果紫色結晶較小較少，溶解的時間會短一些。如果紫色結晶較大較多，溶解的時間會長一些，此時為加速溶解可以適當振搖數次。
5. 在570nm測定吸光度(可參考圖2)。如無570nm濾光片，可以使用560-600nm的濾光片。

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