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環氧活化-瓊脂糖凝膠6B的偶聯步驟級注意事項

作者:北京索萊寶科技有限公司 2016-06-18T00:00 (訪問量:7286)

產品簡介

環氧活化-瓊脂糖凝膠6B以6%瓊脂糖凝膠為基質,采用環氧活化的方法激活瓊脂糖上的羥基,活化后即可直接用于各種配基的偶聯??捎糜诟鞣N含有氨基、巰基 或羥基的親和配基(蛋白質、多肽、氨基酸或糖等)的偶聯。具有使用方便、偶聯條件溫和、偶聯效率高和應用范圍廣的特點。

產品相關參數:

產品名稱:環氧活化-瓊脂糖凝膠6B

貨號:E8260

規格:5g

GRADE:BR

英文名稱:Epoxy-activated Sepharose 6B?

其他名稱:Epoxy活化瓊脂糖凝膠6B

基質:6%高度交聯瓊脂糖凝膠

功能基團:epoxy

配基密度:20-40μmoles/mL drained matrix

平均粒徑:90μm

最大流速:300cm/h

偶聯條件:pH8-10,溫度 4-45°C,時間1-16小時,可在水相和有機相中偶聯

用途:親和層析介質

性狀:白色膠體;

儲存溫度:4-8°C

偶聯步驟

該環氧活化瓊脂糖凝膠介質可以和含有氨基、巰基或羥基的親和配基的蛋白質、多肽、糖等物質偶聯。具體的偶聯方法如下(偶聯BSA為例):

洗滌:用10-20倍膠體積的去離子水沖洗保存存儲液中的環氧活化膠,除去存儲液,抽干;

偶聯:稱取200mg BSA,溶于10ml 0.1M pH 9.0碳酸鈉緩沖液,加入到洗滌抽干的活化膠中,在37℃搖床上振蕩12-24h偶聯,偶聯完畢后將料液轉移到砂芯漏斗中抽干;

封閉:將抽干的偶聯BSA的膠加入到100 ml三角瓶中,加入30 ml 1 mol/L乙醇胺溶液。攪拌速度120 rpm,37 ℃條件下反應4h,然后將料液轉移到砂芯漏斗中抽干。

清洗:然后依次用5倍的去離子水、0.1 M含0.5M NaCl的乙酸-乙酸鈉緩沖液(pH 4.0)、去離子水、0.1M含0.5M NaCl的硼酸-四硼酸鈉緩沖液(pH 8.0)和去離子水充分洗滌后,抽干。

保存:保存于4℃、20%乙醇溶液中。

注意事項:

1.不同配基的偶聯方法與上面類似,但是反應的條件例如:配基加入量,反應時間,反應溫度應根據配基的不同進行適當的調整;?

2.可用碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液做為偶聯緩沖液,但絕對不能使用含有氨基的Tris、甘氨酸的緩沖液。

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