北京索萊寶科技有限公司 張凈花 13426459985

一、細胞培養常見問題解答

1、如何選用培養基？

選擇培養基沒有一定標準，有幾點建議可供參考：

（1）建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞首選的培養基。可以查閱文獻，或在購買細胞株時咨詢。

（2）實驗單位慣用的培養基不妨一試，許多培養基可以適合多種細胞。

（3）根據細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養基。如貼壁細胞培養多選DMEM；進行懸浮細胞培養多用RPMI1640。

（4）用多種培養基培養目的細胞，觀察其生長狀態，可以用生長曲線、集落形成率等指標判斷，根據實驗結果選擇最佳培養基，這是最客觀的方法，但比較繁瑣。

2、solarbio常見培養基的添加成分？

（1）12100?DMEM高糖培養基：葡萄糖4.5g/L,含谷氨酰胺，HEPES，青霉素、鏈霉素，碳酸氫鈉和酚紅。不含丙酮酸鈉

（2）31600?DMEM低糖培養基：葡萄糖1.0g/L,含谷氨酰胺，HEPES，青霉素、鏈霉素，丙酮酸鈉，碳酸氫鈉和酚紅

（3）31800?RPMI?1640培養基：含**鈣，谷氨酰胺，HEPES，青霉素、鏈霉素，碳酸氫鈉和酚紅，不含丙酮酸鈉

（4）90013?DMEM高糖培養基：葡萄糖4.5g/L,含碳酸氫鈉，不含谷氨酰胺，HEPES，青霉素、鏈霉素，丙酮酸鈉和酚紅。

（5）90022?RPMI?1640培養基：不含谷氨酰胺，HEPES，青霉素、鏈霉素，丙酮酸鈉和酚紅。

3、L－谷氨酰胺在細胞培養中的作用？穩定性如何？

合成培養基中都含有較大量的谷氨酰胺，其作用非常重要。?L－谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源，參與蛋白質合成和核酸代謝。

L－谷氨酰胺在溶液中不穩定，在配制各種培養液中都會補加一定量的谷氨酰胺。谷氨酰胺溶液應置于-20℃冰箱中保存，用前加入培養液。加有谷氨酰胺的培養液在4℃冰箱中儲存2周以上時，應重新補加谷氨酰胺。

4、培養基或緩沖液中酚紅的作用是什么？

酚紅在培養基中被用來作為pH值的指示劑，中性時為紅色，酸性時偏黃色，堿性時顯紫色。

研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素），為避免固醇類反應，培養細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細?胞檢測時，不使用加有酚紅的培養基。?????

5、在新鮮培養基中添加了血清和抗生素后，有效期是多長？

如果在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，建議在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

6、細胞培養基中碳酸氫鈉以及HEPES作用？

培養基中使用了NaHCO3-CO2緩沖系統，并采用開放培養，使細胞代謝產生的CO2及時溢出培養瓶，再通過穩定調節溫箱中CO2濃度，與培養基中的NaHCO3處于平衡狀態，從而調節培養基的PH值。

HEPES是一種非離子兩性緩沖劑,?對細胞無毒性作用，在pH?7.2～7.4范圍內具有較好的緩沖能力，能較長時間控制恒定的pH范圍。在開放式培養條件下，觀察細胞時培養基脫離了5%CO2環境，CO2逸出，pH迅速升高，若培養基中含有HEPES，可維持pH7.0左右。一般進行克隆化培養時要添加HEPES。使用終濃度為10～50mmol/L，一般培養液內含20mmol/LHEPES即可達到緩沖能力。

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7、配置的培養基顏色變紫紅色或者偏黃是什么原因？

配好的培養液變堿（變紫紅）是正常的現象。暴露在空氣中的培養液，因為大氣中二氧化碳的濃度很低，培養液中的HCO3?-被漸漸耗掉，培養液的pH值也逐漸升高，變成了紫紅色。如果培養基pH值偏堿的程度不大，可將裝培養液的瓶口擰松，放置于二氧化碳培養箱中一段時間，讓培養箱中的CO2進入培養液，pH值就可以糾正。如果pH值偏離的程度很大，可以通過添加少量無菌的H?Cl?或者NaOH調節pH，便可以使用。

有時在加入血清后培養基顏色會發黃，加入血清后培養基PH會稍微下降，有個別批次的血清，可能發生過溶血因此色素比較高，加血清后培養液會變黃色。培養液寧酸勿堿，一般對細胞影響不大，可正常使用。偏離程度大者可自行調節pH。

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8，使用胰蛋白酶時加入?E?DTA的目的是什么？

胰蛋白酶能消化細胞-細胞，細胞-基質之間得連接從而使細胞從培養板上脫落下來并使細胞分散成單個細胞。鈣鎂離子是保持細胞和細胞之間相互連接所必需的，也是胰蛋白酶抑制劑，EDTA可以螯合鈣鎂離子，保持抑制胰蛋白酶的活性，有助于消化細胞。

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9，細胞培養中的添加劑可以用DMSO和乙醇等有機溶劑配置嗎？

在細胞培養中常常需要加入一些特定的添加劑或藥物，這些試劑水溶性低，不能充分溶解，需要根據產品使用說明用DMSO或者無水乙醇來配置高濃度儲存液。用DMSO和乙醇作為細胞培養添加劑的溶劑時要考慮到細胞的耐受性，一般培養基中要求其濃度不超過0.1%。

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10、細胞培養污染如何讓預防？

溶液處理，復蘇或重新購置細胞，再培養。若污染細胞價值較大，又難于重新得到，可采用5～10?倍于常用量的抗生素沖擊，加入高濃度抗生素后作用24～48h，再換入常規培養液，有時可能奏效。細胞培養中常用的抗生素及用量見下表。?

?????????????????????????????????????????????????????????????常用抗生素用量和效應??????????