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培養基中的添加物、PH值、保存的問題

作者:上海聯碩生物科技有限公司 2021-01-05T10:20 (訪問量:9166)

1、細胞培養用液:除培養基、血清、谷氨酰胺外,其他幾種液體也屬必須,不可省略:

(1)雙抗:200倍,(1ml/支)其終濃度為青霉素100U/ml;鏈霉素100ug/ml,-24度保存。

(2)L-谷氨酰胺:100倍,(1ml/支), 終濃度2mM,-24度保存。

(3)丙酮酸鈉:配制濃度50mM,4ml/支,終濃度為1mM/ml, -24度保存。

(4)Hepes液:配制濃度1M(5ml/支),一支Hepes加入到200ml 完全培養基中,終濃度為25mM/ml,常溫保存。

2、液體培養基中谷氨酰胺的作用,及使用方法。

幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求,細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質,在缺少谷氨酰胺時,細胞生長不良而死亡。所以,各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩定,應置-20度冰凍保存,用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4 度 冰箱儲存兩周以上時,應重新加入原來量的谷氨酰胺。

3、培養用液pH對細胞生長的影響

由于,大多數細胞適宜pH為7.2~7.4,偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不完全相同,原代培養細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。

但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環境中更利于細胞生長。因此,我們在配制培養用液時,可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時,溶液的PH還會向上浮動0.2左右。

4、液體培養基的保存是冷藏好?還是冷凍好?

要冷藏,因為液體培養基經冷凍后再經溶化時,其溶液的PH值會發生改變,溶液往往變堿,某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中,通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 1年。

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