摘要：
??? 該文描述了一個基于熒光檢測的高通量解螺旋酶活性篩選系統，并利用該系統測試了HCV病毒NS3解螺旋酶對DNA及RNA底物的解螺旋活性監控。本系統采用一個人工合成的寡聚雙鏈DNA分子信標為底物。該底物雙鏈分子中的短鏈（信標鏈）的一端連接一個熒光基團，在另一端則連接一個熒光猝滅分子；信標鏈進一步同一個更長的DNA或RNA寡居核苷酸結合形成穩定的雙鏈底物。該底物分子在解螺旋酶和ATP的作用下雙鏈打開后，信標鏈形成分子內發夾結構，熒光基團同猝滅基團靠近而引發熒光猝滅。因而檢測熒光猝滅即可監控解螺旋酶的活性變化。不同于傳統的是螺旋酶活性檢測方法，本方法是不可逆的；因此在測定過程中也無須加入額外的DNA單鏈以防止解鏈后的底物再次結合。該文作者構建了若干種基于不同熒光分子的反應體系，包括最常用的Cy3和Cy5染料分子。文中也介紹了基于該技術的高通量篩選應用。Tecan的Infinite?M200多功能酶標儀被用于反應體系的熒光檢測；其結果表明，在384孔微孔板格式下，Infinite?M200提供的高靈敏度能夠實現穩定的高通量篩選，篩選體系的Z’（評價篩選體系的穩定性及可靠性的數字指標）可達到0.7以上。
附件：
構建分子信標檢測解螺旋酶活性的高通量篩選體系.pdf
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