?描述：
新鮮/冷凍組織胞質胞核分離試劑盒從細胞和組織中分離細胞質和細胞核組分是一種常見的實驗。細胞樣品的組分分離相對簡單直接，然而，?從組織樣品中特別是冷凍組織中將胞質和胞核組分分離干凈是很具挑戰的。因為冷凍和反復凍融會引起組織細胞結構的改變，加之不適當的勻漿方式和效率低的提取緩沖液，使得交叉污染十分嚴重。目前大多數商業試劑盒設計可同時用于細胞和組織樣品，但是忽略了兩種類型樣品之間的結構差異。因此，從新鮮/冷凍組織中分離胞質和胞核組分時，交叉污染問題無法避免(見下文參考文獻?1?和?2)。這款新型的胞質和胞核分離試劑盒專用于組織樣品的胞質胞核分離，試劑盒特有的緩沖液體系和獨特的操作方法可以將交叉污染降到最低。整個操作可以在?30?分鐘內完成。
應用：
可應用于?SDS-PAGE，immunoblottings，ELISA，IP，蛋白定位，凝膠遷移分析，2-D?等其他應用。

試劑盒組分：

1. 緩沖液A?25ml
2. 緩沖液B?10ml
3. 緩沖液D?1.5ml
4. 緩沖液N?1.5ml 5.1.5ml?離心管?40?個6.1.5ml?研磨杵?2?個7.蛋白質提取粉?2?克

運輸：常溫運輸儲存：4?度保存

重要產品信息：

1. 實驗開始前將緩沖液A?和緩沖液B?冰上預冷。
2. 所有的離心步驟請在?4?度環境或?4?度冷凍離心機離心。
3. 使用前推薦將蛋白酶抑制劑加入分裝的緩沖液A?中。
4. 研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑應在使用前加入到分裝的緩沖液?A?和緩沖液?B ?中。
5. 推薦使用BCA?法測定蛋白濃度。
6. 當室溫低于?20?度時緩沖液D?中可能出現白色沉淀，使用前可將緩沖液?D?在?37?度水浴鍋加熱溶解沉淀。

操作方法：

1、?取?20-30mg?新鮮或冷凍組織樣品，放入試劑盒提供的?1.5ml?離心管中，加入?250ul?緩沖液A?覆蓋組織，?冰上孵育?5?分鐘。使用提供的研磨杵輕輕的扭轉研磨樣品?1?分鐘（40-60?次）。研磨杵可以重復使用，?用清水清潔后，用紙巾擦干即可。
2、?14000 X?g，離心?5?分鐘。轉移?200μl?上清液(胞質組分)到新的自備的離心管中保存。(如果上清液不夠澄清,?14000 X g，再離?5?分鐘進一步澄清)。如上所述用研磨杵再次把沉淀進一步研磨?(研磨?60-100?次)。研磨杵放置于管中，加入?0.8 ml?緩沖液?A?到管中。再研磨幾次，拿出研磨杵。用?1?毫升吸頭上下吹打15-20?次混勻。在冰上孵育?5-8?分鐘，讓大的組織碎片通過重力作用沉到底部，將?0.7 ml?的上清液轉移到一個新的試劑盒提供的?1.5 ml ?管中(盡量避免管底大的組織碎片)。
3、?500xg，離心?2?min，棄去上清液。加入?0.5 ml?的緩沖液B，渦旋振蕩?10-20?秒重懸沉淀。冰上孵育?5?分鐘，?2000 X g?離心?2?分鐘，完全去除上清液。
4、?沉淀是分離的細胞核，根據不同的下游應用有兩種核蛋白提取方式可選：

A?.變性核蛋白提取（提取出的核蛋白適用于?SDS-PAGE、Western?blotting?等應用）

用?50μl??緩沖液?D??重懸沉淀(懸液可能粘稠，這是正常的)。稱取?50-60??毫克的蛋白提取粉，加入沉淀(盡量避免接觸管壁)。用研磨杵扭轉研磨約?60-100?次。研磨杵仍置于離心管中，加入?50?-150ul?的緩沖液A?到管中，再研磨幾次(使用緩沖液A?的多少取決于沉淀的大小。研磨杵可以重復使用，用清水清潔后，用紙巾擦干即可