細胞培養好不好？基本操作要領很重要-null-資訊-生物在線

?大家好，上次我們介紹了細胞培養需要的實驗室條件和實驗前準備工作及注意事項。這些知識和小技巧以及小細節都掌握了嗎？今天，小編帶大家學習細胞培養的基本操作步驟和操作要領，助您細胞培養實驗事半功倍。?

細胞的復蘇與凍存

細胞復蘇

將細胞從液氮中取出后，放到37℃水浴鍋中進行快速解凍，邊解凍邊輕微搖晃。

確定凍存管中的細胞解凍完全后，放到水平離心機中離心，1000rpm離心2min。

小心吸掉上清，加入500μL培養基重懸細胞。

一般情況下，T75培養瓶中加10mL的培養基，將細胞加入到已加培養基的培養瓶中。輕輕搖晃培養瓶使細胞均勻分布，放到細胞培養箱中培養。

細胞凍存

從培養箱中取出細胞，觀察細胞的生長狀態是否良好，并觀察細胞的增殖數量。細胞要生長到一定密度再進行凍存。

懸浮細胞不用消化，將細胞輕輕吹散，吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。不同的細胞要用不同的力度，不然會損傷細胞。

貼壁細胞要進行消化，消化完成后，吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。

培養基重懸細胞進行細胞計數，凍存密度在5×10⁶-1×10⁷/mL之間。

按照比例加入10%的DMSO，小心重懸細胞，細胞和DMSO充分混勻。或直接用細胞凍存液進行凍存。將細胞加入到凍存管中，每管1mL。

將凍存管放到凍存盒中進行梯度降溫，最后轉移到液氮中保存。

懸浮細胞培養

懸浮細胞有的結團生長，需要經常觀察細胞狀態。

每次傳代都要將細胞團吹打成單個細胞，吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。

棄上清，重懸細胞。根據細胞生長速度取2×10⁵-5×10⁵個細胞進行傳代培養。

貼壁細胞培養

細胞復蘇

小心吸掉上清，加入2mL PBS，晃動培養瓶，洗掉多余培養基。

加入2mL 胰酶，放到培養箱中消化1-2min，輕拍培養瓶見細胞像沙粒樣散落，立即加入2mL含血清培養基終止消化，并用移液器吹打細胞，使細胞單個散落。吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。

棄上清，重懸細胞。根據細胞生長速度取2×10⁵-5×10⁵個細胞進行傳代培養。

半懸浮（半貼壁）細胞培養

半懸浮細胞就是不完全貼壁，上清中也有細胞。

需要將上清收集到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。

重復貼壁細胞的操作，然后將上清中的細胞和消化下來的細胞重懸到一起再進行傳代培養。

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