人類嗜T淋巴細胞病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒-產品資訊-資訊-生物在線

人類嗜T淋巴細胞病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

作者：上海雅吉生物科技有限公司 2021-05-28T09:20 (訪問量:8788)

人類嗜T淋巴細胞病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 產品及特點

人類嗜 T 淋巴細胞病毒 1 型（Human T-lymphotropic Virus 1 HTLV 1）是一種感染后可導致血癌或其他轉移癌的 RNA 病毒，在體內主要感染 CD4+T淋巴細胞可引起成人 T 淋巴細胞白血病/淋巴瘤、HTLV 相關脊髓?。℉TLV-Iassociated myelopathy ， HAM/ 熱帶痙攣性下肢癱， tropical spasticparaparesis TSP）及色素層炎（uveitis），主要通過輸血、針頭、性行為、母子傳染。HTLV-I 病毒是愛滋病毒（HTLV-I) 的遠親，但 HTLV-I 和愛滋病的發生沒有任何關連。目前各捐血中心以酵素免疫法全面篩檢 HTLV-I 病毒。
本產品就是以探針法熒光定量 PCR 技術為基礎開發的人類嗜 T 淋巴細胞病毒 1 型探針法熒光定量 RT-PCR 試劑盒，它具有下列特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 RNA 模板。
2.引物和探針經過優化，靈敏性高。
3.提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4.特異性高，引物是根據人類嗜 T 淋巴細胞病毒 1 型高度保守區設計，不會跟其他病毒的 RNA 發生交叉反應。
5.本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應。
6.本產品只能用于科研。

成分

編號

十孔盒包裝

探針法 qRT-PCR 緩沖液

190504a

500μL（藍蓋）

探針法 qRT-PCR 酶混合液

190504b

100μL（紅蓋）

熒光 PCR 專用模板稀釋液

180701

1 mL（黃蓋）

人類嗜 T 淋巴細胞病毒 1 型探針

15-87810yw

100 μL（白蓋）

法 qRT-PCR 引物混合液

人類嗜 T 淋巴細胞病毒 1 型

15-87810pb

50 μL（棕色管）

qRT-PCR 探針

人類嗜 T 淋巴細胞病毒 1 型探針

法 qRT-PCR 陽性對照

60908-87810pc

50 μL（黃蓋）

(1×10E8 拷貝/μL)

使用手冊

15-87810sc

1 份
人類嗜T淋巴細胞病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 使用方法
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1.標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。
3.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 RNA 的制備
7.如果有 N 個樣品，最好設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8.用自選方法純化樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。
三、Probe qRT-PCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9.如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于 PCR 陽性對照（用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10.在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加）：

成分

陰性對照

樣品管

N+2 個

管

（2-7 管）

探針法 qRT-PCR 緩沖液

各 10 μL

10 μL

各 10 μL

探針法 qRT-PCR 酶混合液

各 2 μL

2 μL

各 2 μL

人類嗜 T 淋巴細胞病毒 1 型 qRT-

各 1 μL

1 μL

各 1 μL

PCR 探針

人類嗜 T 淋巴細胞病毒 1 型探針

各 2 μL

2 μL

各 2 μL

法 qRT-PCR 引物混合液

待測樣品 RNA 模板

各 5 μL

-

-

超純水

-

5 μL

-

各 5 μL（2

第 7 步所得標準曲線樣品稀釋液

-

-

號樣到2號

（2-7 號）

管，3 號樣到

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