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【產品名稱】
通用名稱：羊痘病毒檢測試劑盒（實時熒光PCR法）
英文名稱：Capripoxvirus?Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規格】 25T/盒 & 50T/盒
【預期用途】
本試劑盒利用實時熒光PCR原理，定性檢測羊痘病毒，對羊痘病毒引起的疾病診斷及療效評估有重要指導意義。
【檢驗原理】
本試劑盒針對羊痘病毒的高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含羊痘病毒基因組模板的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監測和輸出，實現檢測結果的定性分析。
【主要組成成份】
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序號 |
組成 |
25T/盒 |
50T/盒 |
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A盒 |
純化柱 |
25個 |
50個 |
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2ml 收集管 |
25個 |
50個 |
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裂解液（Buffer AL） |
10ml |
20?ml |
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洗滌液（Buffer RW） |
50ml |
100?ml |
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Nuclease Free Water |
5?ml |
10 ml |
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核酸提取說明書 |
1份 |
1份 |
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B盒 |
羊痘?PCR反應液 |
437.5?μL×1管 |
875?μL×1管 |
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羊痘?混合酶液 |
?62.5?μL×1管 |
125?μL×1管 |
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羊痘?陽性對照 |
?40 μL×1管 |
?40 μL×1管 |
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羊痘?陰性對照 |
?40 μL×1管 |
?40 μL×1管 |
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蛋白酶K |
600μL×1管 |
1.2ml×1管 |
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擴增試劑盒說明書 |
1份 |
1份 |
注：陰性對照為偶蹄獸類基因組DNA，陽性對照為失去活性的羊痘病毒cDNA。
【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期12個月。
【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。
【樣本要求】
1. 適用標本類型：發病動物血液、空腸及小腸腸內容物及組織臟器(腸道組織、腸系膜及淋巴結等)和病毒培養液。
2.?標本采集，方法如下：
(1) 血清：用一次性注射器取靜脈血2-3ml，轉至5ml 的干燥管中，密閉送檢。
(2) 腸內容物：無菌條件下取腸道內容物約1g 左右，置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理鹽水)的5ml 離心管中，立即送檢。
(3) 組織臟器：取發病動物腸道組織及腸系膜淋巴結等組織約1g，置一1.5ml的潔凈離心管中，密閉送檢。
3.應避免標本間交叉污染。
4.標本收集后可立即檢測；若不能立即檢測，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存，標本應凍存于-80℃以下，避免反復凍融。
【檢驗方法】
1.?試劑準備（試劑準備區）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。
（2）核算當次實驗所需要的反應數（n），并根據如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。
n =陰性對照數（1T）+陽性對照數（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數
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單反液配制表(每份) |
PCR反應液 |
17.5 μL |
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混合酶液（Taq酶+UNG酶） |
?2.5 μL |
(3)?在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。
2.樣本準備（樣本處理區）
用提供的病毒DNA/RNA核酸提取試劑盒（A盒）提取DNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。
3.加樣
在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5 μl、終體積25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。
4. PCR（PCR擴增區）
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