中華醫學會檢驗醫學分會

通信作者：王成彬，解放軍總醫院第一醫學中心醫學檢驗中心，北京 100853，

段勇，昆明醫科大學第一附屬醫院醫學檢驗科，昆明 650031，

突發新型冠狀病毒肺炎疫情以來，感染病例快速上升。隨著疫情的發展，全國各地乃至境外均有病例報道［1?4］

。及時對急重癥及疑似患者進行診斷需要快速有效的方法，2019 新型冠狀病毒（2019novel coronavirus，2019?nCoV）核酸檢測為診斷提供了直接證據［5?6］。核酸檢測過程中，因對病原體的傳染途徑和致病力尚未完全明確，工作人員存在較大的感染風險。此外，因為2019?nCoV基因結構與一般RNA差別較大，所以檢驗流程、檢驗質量和生物安全均需要進行有效地規范。本共識在參閱國家衛生健康委員會相關文件、查閱文獻、咨詢重疫區相關專家的基礎上進行編寫，以對實驗室檢測工作提出有指導性的建議。本共識適用于從2019?nCoV核酸檢測的所有實驗室。

適用范圍

適用于 2019?nCoV 核酸檢測，如采用逆轉錄PCR（RT?PCR）方法檢測等。

工作程序

一、標本采集

（一）標本采集人員

采集人員必須經過醫院感染管理部門或上級管理部門舉辦的生物安全培訓，并考核合格。標本采集人員應按三級防護配備防護用品，包括工作服、一次性工作帽、雙層手套、防護服、KN95/N95及以上顆粒物防護口罩或動力送風過濾式呼吸器、防護面屏、工作鞋或膠靴、防水靴套，必要時可加穿防水圍裙或防水隔離衣［7?8］

。配備防止病原微生物擴散和感染的設施，如處理感染性廢棄物的垃圾桶、處理緊急意外事件的藥具、具備一定的通風條件等。

（二）受檢人群

新型冠狀病毒肺炎疑似病例、臨床診斷病例（湖北省適用）、確診病例或與上述人群有密切接觸

史者［9］

。

（三）標本采集及包裝標本采集優選順序為鼻咽拭子、口咽拭子、痰液，為提高陽性率，可同時采集1份鼻咽拭子和1份口咽拭子于同一標本采集管中；為控制傳染源可采集糞便進行檢測，為觀察療效可對確診患者的血液進行檢測（需進一步研究支持）。標本采集容器先貼好條形碼，條形碼至少應包含待檢者姓名、標本條碼號、標本類型及采集日期和時間。

1. 鼻咽拭子：盡可能采集發病早期患者的鼻咽拭子標本。待檢者背臥位平躺或充分后仰，以拭子測量鼻尖到耳垂的距離并用手指做標記，將拭子以垂直鼻子（面部）方向插入鼻腔，直至手指觸及鼻尖（拭子深入距離最少應達耳垂部位到鼻尖長度的一半），使拭子在鼻內停留 15~30 s，輕輕旋轉 3~5

（圖 1）；迅速將拭子放入裝有 2 ml 細胞裂解液（與核酸提取試劑盒中裂解液相同）的標本采集管或含

圖1 鼻咽拭子采集示意圖

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中華醫學雜志 2020 年4月7日第 100 卷第13期 Natl Med J China，April 7, 2020, Vol. 100, No. 13DOI:10.3760/cma.j.issn.1005?1201.2020.0.001RNA 酶抑制劑的細胞保存液中，插入拭子后在靠近頂端處折斷無菌拭子桿，旋緊管蓋并用封口膜

封閉［10］。

2. 口咽拭子：盡可能采集發病早期患者的口咽拭子標本。宜用無菌植絨拭子采樣，適度用力拭抹咽后壁部位，應避免觸及舌部；迅速將無菌拭子放入用于采集鼻咽拭子的采集管中，在靠近頂端處折斷無菌拭子桿，旋緊管蓋并用封口膜封閉［10］。

3. 痰液：收集痰液標本時不宜開放氣道收集標本。收集深部**痰液于一次性無菌旋蓋采樣杯中，采樣杯中裝入2 ml 蛋白酶K（1g/L）［11］。收集痰液后旋緊杯蓋并用封口膜封口，盡可能30 min內送檢。如果需長距離運輸標本，不宜先添加蛋白

酶K。

4. 肺泡灌洗液（BALF）：重癥患者或病情進展迅速的肺炎患者，由臨床醫生無菌操作，吸取≥5 mlBALF到帶螺帽的50 ml無菌容器中。收集標本后旋緊標本蓋并用封口膜封口。

5. 糞便：如發病早期出現腹瀉等消化道癥狀的患者，則留取糞便標本3~5 g（黃豆大?。?。標本收集于含 2 ml 生理鹽水（有條件時可添加 RNA 酶抑制劑）的帶螺帽標本采集管中并用封口膜封口。

6. 血液：發病后7 d內或危重癥患者，或考慮病毒血癥的患者，可采集血液標本。使用含有乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝劑的真空釆血管采集血液標本2~4 ml。

7. 標本包裝：標本采集后用75%乙醇噴灑標本采集管外部，立即放入標有“生物危險”密封袋中并封嚴封口；再用75%乙醇噴灑密封袋外部，然后放入標本轉運容器，并對轉運容器進行外部消毒，及時送檢。

二、標本運輸

標本應送至具備檢測資質并經省級衛生行政主管部門批準可從事 2019?nCoV 核酸檢測的基因

擴增檢測實驗室［12］。

1.送檢時間和溫度控制：標本采集后應盡快送檢，采集后應盡可能在2~4 h內送到實驗室；在2 ~8 ℃下轉運，運送時間應不超過24 h。如超過24 h，應在-70 ℃或更低的溫度下保存和轉運。血液標本應分離血漿后進行保存和轉運［9，13］。

2.運輸容器：標本運輸容器應當防水、防破損、防泄露、耐高（低）溫和高壓。運輸容器和包裝材料上應有相關規定的生物危害標識、警示語和提示語。運輸容器應使用三層包裝系統，即內層容器、中層包裝和外層包裝。防漏的內層容器包裝后貼上生物危害標識，裝入中層容器，將“感染性物品”標記貼在外層包裝上。內層容器和中層容器間應放置足量的吸水性材料，中層容器應固定在硬質外層容器中。中層容器與外層容器間應放置凝膠

冰袋［9，14］。

3.院內運輸：標本運送人員進行二級防護并隨身攜帶75%乙醇，以便發生意外時及時處理，標本運送時宜派兩人同行，條件允許時應配備標本轉運

監控裝置。

4.長距離運輸：若標本需要長距離運輸，應當按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種

或 樣 本 運 輸 管 理 規 定》辦 理《準 運 證 書》［15］。2019?nCoV標本運輸包裝屬于A類，對應的聯合國

編號為UN2814。轉運者安全防護按二級防護要求佩戴，并隨身攜帶75%乙醇。司機佩戴外科口罩或N95口罩，通過專用車輛運輸。如果經航空運輸，包裝還應符合國際民航組織文件Doc9284?AN/905《危險品航空安全運輸技術細則》［16］

的 PI602 分類

包裝要求［9］。至少由1名標本運送人員和司機同時轉運標本，宜配備標本轉運過程監控設施。

三、標本接收

1.生物安全防護：標本接收人員按二級防護佩

戴防護設備。

2.標本簽收：標本運送人員和接收人員對標本進行雙簽收。接收標本前應檢查標本轉運容器外包裝有無破損，打開容器前用75%乙醇對標本轉運容器進行噴灑或擦拭消毒。將標本轉運容器放入生物安全柜，在安全柜中打開標本轉運容器并立即用75%乙醇噴灑/擦拭消毒，取出標本密封袋后，對密封袋用75%乙醇噴灑或擦拭消毒，并檢查是否密封好，立即將標本放入專用冰箱冷藏保存［17］。3.標本接收后保存：標本接收后，若無法及時檢測，可于 4 ℃條件下短期（從采集時間開始總時長不超過 24 h）保存，若需長期保存，可將標本于-70℃或更低的溫度下保存［9］。

四、試劑準備

1.試劑選擇參考意見：至少含2019?nCoV基因的兩個位點（開放讀碼框 1a/b、核殼蛋白N或包膜蛋白E）［9］

，反應體系大，加樣量大；檢測試劑能與自動化核酸提取儀和擴增儀配套使用，此外可選用不同引物的試劑盒便于對結果復核。

2.安全防護：建議按三級防護要求進行防護；當條件不允許時試劑配制人員至少應按《醫療機構

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臨床基因擴增檢驗工作導則》［18］

穿戴工作服、一次

性醫用口罩、一次性醫用帽子和單層手套。

五、標本前處理

標本前處理及核酸提取操作的工作人員應進行三級防護。標本前處理應在具有外排功能的生物安全柜中操作。操作過程中宜兩人或據工作量由兩人以上操作，生物安全柜中應配備含 0.55%~1% 含氯消毒液的廢棄物桶［19］。標本處理完后，用75%乙醇消毒，棄去外層手套，對內層手套用75%

乙醇消毒后更換新外層手套。

（一）不同類型標本的處理

1. 鼻咽拭子和口咽拭子：添加了細胞裂解液的標本可直接用于核酸提取，當實驗室條件不夠時可

增加病毒滅活步驟［9］。

2. 痰液：先在55 ℃下孵育15 min進行液化，再進行病毒滅活［11］

。如果痰液采集杯中沒有預加蛋白酶K，則應在病毒滅活后重復此步驟。

3. 肺泡灌洗液和糞便：連同密封袋一起將標本充分振蕩混勻后進行病毒滅活。

4. 血液：1 500×g 離心 10 min，離心后冰浴 3~

5 min 或室溫靜置一段時間（建議10 min 以上），吸取血漿提取核酸。

（二）病毒滅活

提前將水浴箱預熱至選定的滅活溫度。病毒滅活可選擇56 ℃、30 min 或 60~65 ℃、20 min［20?21］

，應注意病毒滅活處理時間是指標本達到設定溫度后的有效作用時間，因標本采集容器不同，在水浴

時標本達到設定溫度的時間也不同，病毒滅活前應測試標本達到設定溫度的時長。在生物安全柜內用75%乙醇噴灑裝有標本的密封袋，用吸水紙擦拭后放入水浴鍋中的試管架上，標本蓋上擱置重物，防止標本采集管漂浮。每隔 10 min 將標本搖勻

1 次（動作輕柔）。可根據提取試劑在標本裂解時所采用的溫度調整滅活溫度，但不能低于56 ℃；提高溫度后可適當縮減滅活時間。滅活條件的優化最好有實驗表明優化條件后對核酸檢測無明顯影響。

注意：病毒滅活可能會降低核酸檢測的靈敏度。

六、核酸提取和加樣

1.實驗前去殘余核酸處理：為盡量減少殘余核酸產生污染的可能，可用75%乙醇對生物安全柜的內壁和臺面以及核酸提取儀內壁和空間進行處理，并紫外線照射 30 min。有條件時可在生物安全柜操作臺面鋪一層吸水性材料［14］

。

2. 標本準備：將滅活后的標本從水浴鍋中取出，在生物安全柜內對密封袋用75%乙醇噴灑/擦拭消毒，打開密封袋后，即時用75%乙醇噴灑/擦拭標本管外部，取出標本冰浴3~5 min或室溫靜置一段時間（建議10 min以上），1 500×g離心5 min后冰浴3~5 min或室溫靜置一段時間（時長同前）。在生物安全柜內打開標本采集管，按核酸提取試劑說明書要求吸取一定量標本（動作輕柔）加入核酸提取試劑中。為保證人員安全，核酸提取純度和效率，宜采用自動化核酸提取方法。

3.標本處理后消毒：采用75%乙醇對生物安全柜、工作臺面、移液器等用品進行噴灑/擦拭消毒

處理［14］。

4.核酸擴增體系的準備：核酸提取完成后，立即將提取物進行封蓋處理。在生物安全柜內將提取后核酸樣本加至PCR擴增反應體系中。

5.廢棄物處理：實驗過程中產生的廢棄物應通過污物通道立即轉移出實驗區，建議采用雙層或三層醫療廢物包裝袋包裝。

6.實驗室及設備消毒和去核酸處理：用75%乙醇對核酸提取儀內壁和其他可用乙醇處理的設備部件進行噴灑處理并紫外線照射30 min。75%乙醇或0.55%~1%含氯消毒液擦拭工作臺面（如用含氯消毒液處理則應在處理完后一定時間內用清水再次擦拭），開啟實驗室紫外燈照射30 min，可同時采用過氧化氫消毒儀進行終末消毒［22］?？梢罁ぷ髁縼?/p>

決定地面消毒頻次，建議至少每周1次，地面消毒可在紫外線消毒后進行，工作人員可著一次性醫用帽子、一次性醫用口罩、單層手套、隔離服和鞋套進入實驗室用0.55%~1%含氯消毒液處理地面，消毒后開啟實驗室通風裝置通風1 h，然后用清水清潔臺面和地面［17］，因含氯消毒液對設備的腐蝕性強，不建議消毒頻次過于頻繁且不宜使用過高的濃度。

七、核酸擴增

1.安全防護：建議按三級防護要求進行防護，當條件不允許時擴增區工作人員可適當降低防護要求，建議至少穿工作服、隔離衣，戴一次性醫用帽子、一次性醫用防護口罩、鞋套和單層手套。按試劑說明進行操作。

2. 核酸擴增：將擴增體系放入擴增儀，核對擴增程序是否與試劑說明書相符，啟動擴增程序，待反應開始后離開實驗室。

3.擴增產物處理：將擴增產物用一次性醫療垃圾袋裝好扎緊，經污物通道轉移至擴增產物廢棄物

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處理區。

4. 實驗室消毒：擴增完成后用紫外線照射30 min?？蓳吮玖繘Q定地面清理的頻次（建議至少每周 1 次），進行地面清潔時可按第六條第 6 點

進行。

結果解釋

一、報告方式

依據《新型冠狀病毒感染的肺炎實驗室檢測技術指南》［9］，建議報告為“陽性”、“陰性”，應進行充分的結果解釋，并對下一步工作提出建議。

二、判讀條件

1. 判讀為“陽性”的條件：需滿足以下任意一條：（1）ORF1ab 和 N 基因同時陽性時，判定為陽性［9］

；（2）若僅ORF1ab或N基因其中之一檢測結果陽性時，需重新采樣復查，復查后ORF1ab或N基因仍為陽性時，判定為陽性，或采用其他試劑或方法進行確認（如基因測序法）。

2. 判讀為“陰性”結果的處理：兩個檢測位點無Ct 值或 Ct≥40（具體參照試劑說明書），可報告“陰性”，并對結果進行解釋。陰性結果不能完全排除2019?nCoV感染，此情況可能是病毒載量低于檢出限，應結合臨床分析。當臨床表現及其他檢查高度懷疑2019?nCoV感染時，建議重新采集標本或更換部位采集標本再次檢測。

3. 處于“灰度區”結果的處理：當出現 Ct 值在37~40 之間時為灰度區（具體情況參照試劑說明書）?？赡艽嬖谙铝星闆r：（1）2個位點的檢測結果均處于“灰度區”；（2）1個位點判讀為陽性，另1個位點的結果處于“灰度區”；（3）1 個位點判讀為陰性，另1個位點的結果處于“灰度區”。出現以上情況時宜重新提取原標本的核酸，并與該標本前一次提取的核酸同時擴增檢測。分析兩次檢驗結果，單個位點兩次陽性或兩個位點為陽性，則報告“陽性”；兩次結果均處于“灰度區”則報告“陰性”。檢測結果處于“灰度區”時，實驗室可采取以下

措施：（1）核查檢驗過程是否有影響，如樣本質量、標本類型、樣本采集時機（是否處于病毒載量較低的時期）、標本保存、運輸和標本處理是否存在問題；（2）更換不同廠家的試劑盒重復實驗，或在條件允許時采用敏感度更高的方法進一步確定（如數字PCR 方法）；（3）建議臨床重新采集標本或更換部位采集標本再次檢測，甚至多次采樣進行檢測。

質量控制

1.人員培訓：標本采集人員應熟練掌握采集方法；實驗室工作人員應準確掌握工作流程和操作。

2.標本采集：標本采集管中如果加入了細胞裂解液或蛋白酶 K，應注意有效期和保存條件符合要求。

3.標本運輸：標本要及時送檢，院內運輸最好在2~4 h內送檢，且送檢時間越短越好，送檢時標本包裝容器中應放置含凝膠的冰塊。

4.標本接收與處理：標本接收后應及時處理，特別是痰液和口/鼻咽拭子，因為這些標本中加入了痰液液化劑或細胞裂解液，操作時間延長將導致核酸的降解。

5.質控品的使用：試劑盒中陽性質控品（應注意試劑盒中提供的是對照品還是質控品，確保正確使用）應及時取出，放置于標本制備區的冰箱中。實驗室條件允許的情況下，可將陽性標本滅活后當作陽性質控品使用，陽性質控應選用濃度相對較低的標本。當室間質評機構能提供相應質控物時，應參加室間質量評價。

6.設置充分的對照：包括試劑對照、陰性對照和陽性對照。試劑對照即擴增反應體系中僅含PCR擴增反應試劑。陰性對照可選用無菌水，每天實驗結束后配制3~5份無菌水（2 ml試管加入無菌水）分別放置于標本制備區和擴增區的不同位置，

用于實驗室污染控制。陽性對照建議選擇陽性樣本的核酸。陰性對照和前述的質控品均應與標本

平行操作。

7.正確使用75%乙醇：在實驗過程中合理減少75%乙醇的使用量，降低安全事故發生的風險和對基因擴增反應抑制的可能性。

8.降低氣溶膠形成風險：標本前處理過程中動作應輕柔，減少氣溶膠形成，標本應靜置或冰浴足夠的時長。

9.優化工作流程：應積累經驗，合理安排工作流程，特別是核酸提取之前的工作流程越緊湊越有利于減少核酸降解。為降低實驗室各區間核酸交叉污染，進行2019?nCoV核酸檢測宜分工合作。

廢棄物處理

1.人員要求：處理廢棄物的人員必須經過醫院感染管理部門或上級管理部門舉辦的生物安全培

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中華醫學雜志 2020 年4月7日第 100 卷第13期 Natl Med J China，April 7, 2020, Vol. 100, No. 13訓，取得培訓合格證書，并具備相應的專業技能。

2.感染性廢棄物處理：與標本接觸過的醫療廢物，如吸頭（tip頭）、采樣管、小離心管（如EP管）等應用0.55%~1%含氯消毒液處理，用三層醫療廢物包裝袋（標有“感染性廢物”）裝好扎緊后轉出實驗區，經高壓滅菌后按醫療廢物處理［23］。防護服、鞋套、手套、口罩等用75%乙醇消毒后收集于三層醫療廢物包裝袋，外層包裝袋上應有中文標簽，標簽

內容包括：醫療廢物產生單位、產生部門、產生日期、類別，并在特別說明中標注“新型冠狀病毒感染的肺炎”或者簡寫為“新冠”。經高壓后按醫療廢物

處理［24］。

3.處理核酸的廢棄物處理：提取與加樣過程中與核酸接觸過的材料，如tip頭、EP管、核酸提取槽等浸泡于0.55%~1%含氯消毒液中，建議浸泡時間不少于1 h，浸泡后用醫療廢物包裝袋裝好并扎緊，經高壓后按醫療廢物處理。

4.核酸擴增產物終處理：建議擴增產物在專門的房間進行終處理，將含產物的擴增反應管在0.55%~1%含氯消毒液中開蓋，切記不能在空氣中開蓋，經0.55%~1%含氯消毒液處理后（建議1 h以上）按醫療廢液處理。

5.廢棄物的安全管理：操作人員應及時處理廢棄物，并做好登記。不得私自將廢棄物帶離實驗區。醫療廢棄物應按《醫療衛生機構醫療廢物管理辦法》［23］進行處理，能夠焚燒的，應當及時焚燒；不能焚燒的，應當消毒后集中填埋。

執筆者：劉子杰（昆明醫科大學第一附屬醫院檢驗科）；

童永清（武漢大學人民醫院檢驗醫學中心）；伍均（上海市第一人民醫院檢驗醫學中心）；杜魯濤（山東大學第二醫院檢驗醫學中心）；魏超君（甘肅省人民醫院臨床研究與轉化醫學研究所）共識制定專家組成員（按姓氏漢語拼音排序）：崔?。ㄖ袊t學科學院腫瘤醫院檢驗科）；曹永彤（中日友好醫院檢驗科）；陳鳴（西南醫院檢驗科）；蔡貞（南方醫科大學南方醫院檢驗科）；陳葳（西安交通大學第一附屬醫院檢驗科）；段勇（昆明醫科大學第一附屬醫院檢驗科）；丁海濤（內蒙古自治區人民醫院檢驗科）；杜魯濤（山東大學第二醫院檢驗醫學中心）；關明（復旦大學附屬華山醫院檢驗科）；郭瑋（復旦大學附屬中山醫院檢驗科）；高春芳（第二軍醫大學附屬

東方肝膽外科醫院檢驗科）；郝曉柯（空軍軍醫大學西京醫

院檢驗科）；胡成進（解放軍第960醫院實驗診斷科）；黃山（貴

州省臨床檢驗中心）；姜艷芳（吉林大學第一醫院基因診斷

中心）；李金明（國家衛生健康委員會臨床檢驗中心）；劉子杰

（昆明醫科大學第一附屬醫院檢驗科）；李萍（湖南中醫藥大

學第一附屬醫院醫學檢驗與病理中心）；李卓（西安醫學院

第一附屬醫院檢驗科）；明亮（鄭州大學第一附屬醫院檢驗

科）；潘世揚（南京醫科大學第一附屬醫院檢驗學部）；沈佐君

（中國科學技術大學附屬第一醫院科研處）；蘇建榮（首都醫

科大學附屬北京友誼醫院檢驗科）；孫自鏞（華中科技大學

同濟醫學院附屬同濟醫院檢驗科）；童永清（武漢大學人民

醫院檢驗醫學中心）；王成彬（中國人民解放軍總醫院醫學

檢驗中心）；王輝（北京大學人民醫院檢驗科）；汪俊軍（東部

戰區總醫院檢驗科）；伍均（上海市第一人民醫院檢驗醫學

中心）；魏超君（甘肅省人民醫院臨床研究與轉化醫學研究

所）；許斌（江蘇省腫瘤醫院省臨檢中心）；于農（上海交通大

學附屬新華醫院蘇州分院檢驗科）；鄭磊（南方醫科大學南

方醫院檢驗科）；張義（山東大學齊魯醫院檢驗科）；張新（新

疆生產建設兵團醫院檢驗科）；張櫻（中國人民解放軍總醫

院醫學檢驗中心）

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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（收稿日期：2020?02?06）

（本文編輯：張媛）

·讀者·作者·編者·

本刊“疑難病例析評”欄目征稿

中華醫學雜志開辟“疑難病例析評”欄目，論文性質等

同于本刊論著。結構分“病歷摘要”和“分析與討論”兩部分。

1.病例選擇：（1）疑難病例，特別是涉及多學科、多領域

的疑難病例。（2）誤診且有經驗教訓的病例。（3）診斷已經明

確，但病情危重或有諸多并發癥，治療上甚為棘手的病例。

（4）罕見病例。（5）其他對臨床實踐有指導或提示意義的病

例。以上病例須最終獲得明確診斷或成功治療，臨床資料

應齊全，能提供實驗室、影像學和（或）病理確診證據。

2.寫作格式：文題可用主要癥狀、體征或診斷命題，各

短語之間用一字線連接。正文分“病歷摘要”和“分析與討

論”兩部分。“病歷摘要”部分：交代清楚患者主訴、病史（包

括既往史）、作者接診后的診治經過等。應提供必要的實證

圖片。字數以不超過1 000字為宜（不包括圖片）。“分析與

討論”部分：要求邏輯性強，條理清楚，能較好地體現正確的

臨床思維，對讀者的臨床工作有實際借鑒意義。重點部分

可采用序號標示法，以突出層次。寫作上應滿足以下要求：

（1）開門見山，首先說明本例需要從哪幾個方面討論；（2）寫

清診斷和治療思路，如何發現并優先處理疾病的關鍵問題；

（3）請將疑點、鑒別診斷要點另列出，通過什么手段排除相

關疾??；（4）給出本例的最后診斷和診斷依據；（5）若為誤

診，則總結經驗教訓；（6）若為罕見病，則介紹目前國內外的

最新進展；（7）列出相關的國內外主要參考文獻。字數以控

制在2 000～2 500字為宜。