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?勝創生物秋爽價震撼來襲！

??????????????????????????????????活動時間：8月15日-9月24日

T4?DNA連接酶（快速）

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產品描述
T4?DNA連接酶催化雙螺旋DNA或RNA的5′磷酸末端基團和3′羥基末端基團之間形成磷酸二酯鍵。該酶能夠有效的連接平末端和黏性末端，同時修復雙螺旋DNA、RNA或DNA/RNA雜交鏈中的單鏈缺口。

蛋白來源
攜帶克隆的T4?DNA連接酶基因的重組大腸桿菌菌株。
組成成分：
10?mM?Tris-HCl
50?mM?KCl
1?mM?DTT
0.1?mM?EDTA
50%?glycerol
pH?7.5?@?25°C
隨酶提供：
B1010?(2X?Rapid?Ligation?Buffer)
B6030?(10X?T4?DNA?Ligase?Buffer)
2X?Rapid?Ligation?Buffer?(B1010):
132mM?Tris-HCI
20?mM?MgCl2
2?mM?DTT
2?mM?ATP
15%?PEG?6000
pH?7.6?@?25°C
10X?T4?DNA?Ligase?Buffer?(B6030):
500mM?Tris-HCI
100?mM?MgCl2
50?mM?DTT
10?mM?ATP
pH?7.6?@?25°C

單位定義
1?unit?被定義為23°C下、30分鐘內，在50?μl?1X?T4?DNA連接酶緩沖液中能夠連接50%的具有粘性末端的100?ng?DNA片段的DNA連接酶量。

產品信息
T4?DNA?Ligase?(Rapid)
Part?Number??L6030-HC-F
Concentration??600,000?U/ml
Unit?Size????????????26,000?U
SDS??????????Available?on?request

產品特性
Storage?Temperature?????-25?to?-15°C
Test???????????????????????????Specification
Purity?(SDS-PAGE)???????????>99%
Specific?Activity????????300,000?U/mg
SS?Exonuclease??????6,000?U?<1.0%?released
DS?Exonuclease??????6,000?U?<1.0%?released
DS?Endonuclease?????6,000?U?=?no?conversion
E.coli?DNA?Contamination?6,000?U?<10?copies

產品要點：
T4?DNA連接酶是ATP依賴的酶。建議舍棄在-20°C儲存一年的反應緩沖液，用新鮮的緩沖液代替以確保最大性能。當把一個嵌入物當做目標靶物：矢量比在2到6之間時，單個嵌入的連接反應是最佳的。6:1以上的比率將會促進多重片段的嵌入，當下降到2:1比率時，將會降低連接效率。
對于有疑問的連接反應或如果DNA濃度是未知的，那就有必要將比率多樣化并進行多重連接反應。
高濃度的PEG將會顯著的降低電能細胞的轉化效率。為了將電能細胞轉化效率最大化，下面給出寫推薦的方法：
最好的：在接下來的連接反應中，利用DNA凈化吸附柱來凈化產物，并用50uL的TE洗提。DNA即準備轉化。DNA最終被轉化的量應該在0.1-10?ng的范圍之間。
較好的：在ddH20?或TE中稀釋連接產物將會降低PEG濃度。DNA最終被轉化的量應該在0.1-10?ng的范圍之間。
高濃度的T4?DNA連接酶與2X快速連接緩沖液相結合能夠顯著提高平末端連接的速度和效率，因此不建議有較長的潛伏期（>10分鐘），因為長的潛伏期能夠顯著的降低連接產物的轉化效率。為了將正確嵌入或矢量結合的轉化效率最大化，建議使用下面的方案。
酶的10X?T4?DNA連接酶緩沖液不包含PEG，并與標準連接反應方案一致，該方案并沒指定利用快速的緩沖區規格。

操作說明：
反應體系:
體積???????????????????組分?????????????????????????????????終濃度
10?μL??????2X?Rapid?Ligation?Buffer??????????????1X
X?μL????????????????Vector????????????????????????????????1-10?ng/μL
X?μL???????????????Insert??????????????????????????????????????1-10?ng/μL
1?μL????????T4?DNA?Ligase?(600?U/?μL)??????????30?U/μL
X?μL????????????Type?I?Water??????????????????????????????N/A
20?μL???????????????????????????????????????????????????????????總體積
加入以上所有成分于反應管中，吹打混勻，25℃，10min孵育，立即使用PCR洗脫柱進行DNA的純化，洗脫于50ulTE或雙蒸水存儲或者直接進行稀釋（稀釋比例至少1：10）并進行轉化，將0.1-10ng?連接產物轉入相應載體的電轉或鈣轉的感受態細胞中。

參考文獻
Engler,?M.J.?and?Richardson,?C.C.?(1982)?P.D.?Boyer?(Eds.),?The?Enzymes,?5,?pp.?3.?San?Diego:?Academic?Press.

適用范圍
該產品被研制、生產加工及銷售，僅用于體外，不適用于人類和動物注射。

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