大鼠血管生成素Ⅱ（Ang Ⅱ）檢測試劑盒（ELISA）方法

使用說明書

僅供科研使用，不得用于醫學診斷。

使用前仔細閱讀本說明書。
用 途： 用于定量檢測大鼠血清、血漿及相關液體樣本中血管生成素Ⅱ（Ang Ⅱ）的含量。
工作原理
本試劑盒采用雙位點夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），測定樣品中大鼠血管生成素Ⅱ（Ang Ⅱ）的水平。向預先包被大鼠血管生成素Ⅱ（Ang Ⅱ）抗體的酶標孔中加入標準品、待測樣本和HRP標記的血管生成素Ⅱ（Ang Ⅱ）抗體，經過溫育和洗滌，去除未結合的組分，然后再加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠血管生成素Ⅱ（Ang Ⅱ）的濃度呈正相關。

需要而未提供的試劑和器材

1．37℃恒溫箱。

2．標準規格酶標儀。

3．精密移液器及一次性吸頭

4．蒸餾水，

5．一次性試管

6．吸水紙

注意事項
1．從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差
3．建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
4．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
5．為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
6．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
7．底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
操作步驟
1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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