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| 在核酸分子的恒溫擴增過程中,無論采用LAMP、HDA、RCA、CPA、SMAP等擴增技術,這種高速度的擴增特性,均不可避免的引起假陽性擴增。這種假陽性的擴增情況在LAMP擴增中表現尤為明顯,由于LAMP擴增用到很高濃度的引物,因此難免保證有少量錯配和引物Dimer,這些輕微的污染都會導致在LAMP高速擴增中造成假陽性。優化的反應緩沖液,配合獨有的顯色技術和陰性控制技術建立的預混恒溫mix系列產品,可高靈敏度、高特異性的用于LAMP HNB變色、LAMP紅黃變色、LAMP OG變色、 LAMP 濁度分析、LAMP SYBR Green熒光檢測、HDA熒光檢測、RCA熒光檢測、CPA熒光檢測、SMAP熒光檢測的擴增反應。在LAMP擴增實驗中,與其它公司提供的 DNA/RNA LAMP MasterMix 或 LAMP Mix相比,得益于 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶的出色性能,Bst 4.0 IsoAmp Red MasterMix具有更快的擴增速度和雜質耐受性。 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶對dUTP底物的超強識別能力,擴增反應所需的核苷酸底物dTTP可被dUTP完全取代,因此擴增產物均包含dUTP,在配合熱敏UDG的情況下,氣溶膠污染物,將會在起始反應階段被徹底清除。而后續熱敏UDG在65℃條件下3min內,完全不可逆失活;從而既能消除污染物,又能保證核酸正常擴增。因此,應用該試劑能大大降低LAMP反應中由于氣溶膠污染造成的假陽性信號。 |
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使用特征 |
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以2019-nCov核酸擴增為例三種方法的性能比較 |
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實例展示 |
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| 1、A3824-01 紅黃變色反應(肉眼觀察) 以2019-nCoV 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起始前,下圖為 65 度反應 30min 后。 |
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| 2、A3824-02 搭配 OG 橙綠變色反應管(A3821)(肉眼觀察) 以2019-nCoV 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起始前,下圖為 65 度反應 20min 后。 |
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| 3、A3824-03 用于熒光檢測(便攜式恒溫檢測儀) 以2019-nCoV 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起始前,下圖為 65 度反應 26min 后。 |
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| 4、A3802 用于HNB變色擴增反應 采用環引物對7個樣本(HHV-6 DNA核酸模板進行恒溫HNB變色檢測反應),NTC為不加模板的對照,產物以HNB顯色如下圖。 |
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| 5、首先使用含dUTP的Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix擴增獲得三種基因產物(AFSV P72,Covid-19 N Gene-1,Covid-19 N Gene-2),然后以105拷貝的含U產物作為模板,分別用Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix(with UDG)和Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix 進行擴增,反應結束后統計兩組之間的Ct,結果為:UDG組在30min內幾乎不起峰,無信號;未加UDG組均在4min之前起峰,表明該Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix(with UDG)具有良好的去除殘留模板的能力。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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