在實驗室小心翼翼的你，怎奈何體外細胞的脆弱不堪，百密終有一疏。
你偶然的一個噴嚏，不經意地撩了下秀發，小動作一時爽，細胞白培養！

預防和避免污染是細胞培養成功的關鍵因素，一旦污染不僅浪費時間，而且浪費人力、物力，甚至造成無法彌補的損失。值得慶幸的是并非所有的細胞污染都是致命的，及時發現，采取正確的方式力挽狂瀾方為正道！

細胞培養過程中的污染不僅僅指微生物，還包括所有混入培養環境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質。常見的污染主要包括：細菌、真菌、支原體、黑膠蟲、病毒、原蟲以及非細菌污染共七種類型，每一種污染都有各自的特點，如細菌和真菌增殖迅速，短時間內會對細菌造成明顯傷害，而支原體和病毒對細胞的影響則是一種緩慢長期的過程。

1、細菌、真菌污染檢測
（1）肉眼觀察
細菌、真菌污染一般是由傳代、換液、加樣等開放性操作因此，而且增生十分迅速。
若有污染，在48小時內可觀察到明顯特征，例如培養液變混濁，略加振蕩后培養液中有很多漂浮物。

（2）接種觀察
采用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養液接種，接種后可明顯觀察到是否有污染。

（3）鏡下觀察
在倒置顯微鏡的高倍鏡下若見培養液中有大量圓球狀顆粒漂浮，即可判定為細菌污染。
若觀察到細胞之間有絲狀、管狀、樹枝狀或卵形的物質即可判定為真菌污染。


2、支原體污染檢測
（1）相差顯微鏡觀察
直接取少許培養液滴在載物片上，利用顯微鏡觀察。
支原體在鏡下呈暗色微小顆粒，多位于細胞與細胞之間，有時可見類似于布朗運動的表現。

（2）熒光染色法觀察
用熒光染料Hoechst33258，此染料能與DNA特異性結合，可使支原體內的DNA染色并在熒光顯微鏡下呈綠色小點，散在于細胞周圍或附于細胞表面。

（3）電鏡檢測
若條件許可，可在細胞培養48~72小時，用胰酶消化細胞制成細胞懸液后進行固定、包埋、切片后可用掃描電鏡或透射電鏡觀察。

（4）培養檢測
將細胞懸液5mL加入45mL支原體肉湯培養基，培養14天后觀察肉湯培養有無霧狀沉淀，然后取0.5ml加入已冷卻到50℃的培養基中，再用瓊脂培養基做分離培養，37℃培養3天觀察有無“荷包蛋”菌落出現。


3、病毒污染檢測
（1）應用電鏡技術快速診斷動物病毒病

（2）逆轉錄_聚合酶鏈反應RT_PCR檢測病毒

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