?傷口愈合實驗是體外研究細胞遷移的的一個有用的實驗。原理是人為的在鋪板的單層細胞中制造一個空白的無細胞的地帶，然后對這個無細胞地帶的邊緣的細胞進行觀察；這些邊緣的細胞會開始進行遷移活動，并且最終覆蓋整個無細胞的區域，重新互相接觸在一起。法國的科研人員在2015年的?STEM?CELL上發的文章中提出神經生長因子（NGF）和神經生長因子前體（proNGF）會自動的激活乳腺癌干細胞，并且發生侵襲。文中，使用乳腺癌細胞系和腫瘤分離的細胞進行傷口愈合實驗，得出，由NGF處理的腫瘤離的乳腺癌細胞的傷口愈合速率有非常顯著的提高。說明在NGF能促進乳腺癌細胞遷移活動。
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Nerve?Growth?Factor?and?proNGF?Simultaneously?Promote?Symmetric?Self-Renewal,?Quiescence,?and?Epithelial?to?Mesenchymal?Transition?to?Enlarge?the?Breast?Cancer?Stem?Cell?Compartment
E.?Tomellini,?Y.?Touil,?C.?Lagadec,?S.?Julien,?P.?Ostyn,?N.?Ziental-Gelus,?S.?Meignan,?J.?Lengrand,?E.?Adriaenssens,?R.?Polakowska?and?X.?Le?Bourhis
STEM?CELLS,?2015,?10.1002/stem.1849
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在文中，使用Ibidi開發的傷口愈合插件進行了傷口愈合實驗。這是一種雙孔的硅膠插件，可以放在培養皿中，插件兩孔間的孔壁寬度為500μm。將細胞種在插件中，等待細胞貼壁長滿后，將插件移除，這樣，兩孔間的縫隙就是一個無細胞的“劃痕”。
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一.實驗材料
1)?細胞:?????MCF-7?、腫瘤分離細胞
2)?實驗耗材:???傷口愈合插件培養皿?(ibidi,?81176)?
3)?細胞培養基:??MEM?medium
4)?試劑:??EGF??（sigma，?E9644）
???????????bFGF?（R&D，233-FB）
???????????NGF??（Scil?Protein）
???????????proNGF?（Alomone?Labs，N-285）
5)?滅菌鑷子
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一.實驗步驟
1.鋪細胞（圖三）
●?將ibidi傷口愈合培養皿底部的保護膠帶撕除。
●?在ibidi細胞插件的每孔中加入1?×?104的細胞懸液。注意不要大力晃動培養皿。以防止細胞不均勻。
●?在37。C培養箱中孵育24小時。
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圖三：A.?去除培養皿底部的保護膠帶。B.C.在ibidi傷口愈合插件中加入細胞。
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1.形成“劃痕”
●?采用無血清MEM培養基培養細胞4小時
●?如圖四所示，小心的用鑷子夾住插件的一個角，將插件移除。?
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●?移除插件后，要用顯微鏡檢查是否形成合格的“劃痕”。
●?小心的清洗細胞，之后加入2ml培養基進行培養（圖五）。
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1.采集并分析圖像
●?在顯微鏡下選取能同時看到“劃痕”和兩邊細胞的視野進行成像，“劃痕”的方向最好是水平或者垂直。
●?采集0h和4h的圖像，并且分析每張圖的細胞覆蓋劃痕區的面積。
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（三）實驗結果
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如圖所示，ML表示MCF-7?細胞系。腫瘤分離細胞團分別由EGF、bFGF、NGF和proNGF處理，由t-EGF/bFGF、t-NGF、t-proNGF表示?？梢钥吹接?/span>NGF處理的細胞，在4h的時候覆蓋面積最大，遷移速率最快。