1. 試劑盒組成?

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Megazyme亞硫酸鹽檢測試劑盒可進行50次測定實驗。檢出限為0.34 mg / L。每次測定在1至50 μg亞硫酸鹽范圍內呈線性分析。并提供有完整的試驗方法：

組成?

內容物?

儲存條件?

瓶 1

緩沖液 28 mL 加上疊氮化鈉(0.02% w/v)作為防腐劑?

4℃保存，穩定性>2年

瓶 2

NADH，冷凍干粉

在-10°C 以下穩定 2 年?

瓶 3

NADH 過氧化物酶懸浮液(1.1 mL)??

4℃保存，穩定性>2 年

瓶 4

亞硫酸鹽氧化酶混懸液(1.1 mL)

4℃保存，穩定性>2 年

瓶 5

硫酸鈉標準粉末(5g)

常溫保存，穩定性>5 年

2.試劑溶液/懸浮液制備?

1.?瓶1和瓶4的試劑可直接使用，4℃保存，穩定性>2年。

2.?將第2瓶的液體溶解在11mL蒸餾水中。在4°C下穩定> 1年，或在-10°C以下穩定> 2年(為了避免重復的凍融循環，將其

分成適當大小的塊并儲存在聚丙烯管中)。

3&4 瓶3和瓶4的試劑可直接使用。在第一次開瓶之前，搖動瓶子以去除可能附著在橡膠塞子上的任何酶。隨后，將瓶子直立放

置。在使用前旋轉瓶子使其混合。在4℃下穩定> 2年。

5. ?????稱1g檸檬酸到1L的容量瓶中，用蒸餾水溶解至1L。準確加入590 mg的亞硫酸鈉，溶解后直接使用。這種亞硫酸鹽溶液相當于300毫克/升的二氧化硫。溶液中的亞硫酸鹽不穩定，每小時會失去約2%的亞硫酸鹽含量，因此該溶液須在使用當日配制。?

注意: ?

1.?僅在對所使用的分光光度計的準確性存在疑問或懷疑樣品中的物質引起抑制的情況下才能測定亞硫酸鹽標準溶液。 亞硫酸鹽的濃度直接由NADH的消光系數確定。

2.?僅使用新鮮蒸餾水進行測定?；蛘?，在攪拌下用1g活性炭處理100?mL脫礦質水5分鐘，然后過濾。

3.儀器和裝置 (推薦)

1)?容量瓶（1L）

2)?一次性塑料或玻璃比色皿（光路1厘米，3mL）

3)?微型移液器，例如 GilsonPipetman?（20?μL，200?μL和1 mL）

4)?多通道移液器，例如 EppendorfMultipette?

含25 mLCombitip?（可分配0.5 mL等分的緩沖液1和0.2 mL NADH溶液等分試樣）

5)?時鐘

6)?分光光度計設置為340nm

7)?渦旋混合器（例如IKA?Yellowline?Test?Tube?Shaker?TTS2）。

8)?恒溫水浴

4．檢測方法?

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波長: 340 nm

比色杯: 1 cm 光路 (玻璃或者塑料) 溫度: ~ 25°C

最終體積: 3.34 mL

樣品溶液: 每個比色皿1.0-50 μg亞硫酸鹽（在0.10-2.00 mL樣品體積中）

空白調 0：相對于空氣或者水

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移液至3mL比色管?

空白管?

樣品管?

蒸餾水25℃

2.60 mL

2.50 mL

樣品溶液

-

0.10 mL

溶液 1 (緩沖液)

0.50 mL

0.50 mL

溶液 2 (NADH)

0.20 mL

0.20 mL

懸浮液 3 (NADH過氧化物酶)

0.02 mL

0.02 mL

混合*，約4分鐘后讀取溶液（A1）的吸光度，并添加以下物質開始反應：

懸浮液4（亞硫酸鹽氧化酶）

0.02 mL

0.02 mL

混合*停止反應后（約30分鐘）讀取溶液（A2）的吸光度。如果反應在30分鐘后仍未停止，則繼續每隔10分鐘讀取吸光度，直到吸光

度穩定或持續下降超過10分鐘**。

* 例如用塑料刮刀攪拌或用比色皿蓋/封口膠密封后輕輕翻轉比色皿

**如果樣本的蠕變速率比空白管大，推斷樣本和空白的吸光度為加入懸浮液4(亞硫酸鹽氧化酶)時的吸光度值。

注意:

由于亞硫酸鹽溶液的特性不穩定，樣品制備后應盡快進行分析。

5．結果計算?

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分別對樣品管和空白管兩次測得的吸光度值進行相減(A2-A1)，然后從樣品管的(A2-A1)中減去空白管的(A2-A1)，這樣得到ΔA亞硫酸鹽。按照常規，ΔA亞硫酸鹽的數值至少要在0.100個吸光單位才能獲得滿意的試驗結果。

SO2的含量可以依照下列公式計算：

c ???= ????????V ?× ?MW ??????????x ???ΔA 亞 硫 酸 鹽??????????[g/L] ε × d?×