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1. 試劑盒組成?

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Megazyme亞硫酸鹽檢測試劑盒可進行50次測定實驗。檢出限為0.34 mg / L。每次測定在1至50 μg亞硫酸鹽范圍內(nèi)呈線性分析。并提供有完整的試驗方法：

組成?

內(nèi)容物?

儲存條件?

瓶 1

緩沖液 28 mL 加上疊氮化鈉(0.02% w/v)作為防腐劑?

4℃保存，穩(wěn)定性>2年

瓶 2

NADH，冷凍干粉

在-10°C 以下穩(wěn)定 2 年?

瓶 3

NADH 過氧化物酶懸浮液(1.1 mL)??

4℃保存，穩(wěn)定性>2 年

瓶 4

亞硫酸鹽氧化酶混懸液(1.1 mL)

4℃保存，穩(wěn)定性>2 年

瓶 5

硫酸鈉標準粉末(5g)

常溫保存，穩(wěn)定性>5 年

2.試劑溶液/懸浮液制備?

1.?瓶1和瓶4的試劑可直接使用，4℃保存，穩(wěn)定性>2年。

2.?將第2瓶的液體溶解在11mL蒸餾水中。在4°C下穩(wěn)定> 1年，或在-10°C以下穩(wěn)定> 2年(為了避免重復(fù)的凍融循環(huán)，將其

分成適當大小的塊并儲存在聚丙烯管中)。

3&4 瓶3和瓶4的試劑可直接使用。在第一次開瓶之前，搖動瓶子以去除可能附著在橡膠塞子上的任何酶。隨后，將瓶子直立放

置。在使用前旋轉(zhuǎn)瓶子使其混合。在4℃下穩(wěn)定> 2年。

5. ?????稱1g檸檬酸到1L的容量瓶中，用蒸餾水溶解至1L。準確加入590 mg的亞硫酸鈉，溶解后直接使用。這種亞硫酸鹽溶液相當于300毫克/升的二氧化硫。溶液中的亞硫酸鹽不穩(wěn)定，每小時會失去約2%的亞硫酸鹽含量，因此該溶液須在使用當日配制。?

注意: ?

1.?僅在對所使用的分光光度計的準確性存在疑問或懷疑樣品中的物質(zhì)引起抑制的情況下才能測定亞硫酸鹽標準溶液。 亞硫酸鹽的濃度直接由NADH的消光系數(shù)確定。

2.?僅使用新鮮蒸餾水進行測定。或者，在攪拌下用1g活性炭處理100?mL脫礦質(zhì)水5分鐘，然后過濾。

3.儀器和裝置 (推薦)

1)?容量瓶（1L）

2)?一次性塑料或玻璃比色皿（光路1厘米，3mL）

3)?微型移液器，例如 GilsonPipetman?（20?μL，200?μL和1 mL）

4)?多通道移液器，例如 EppendorfMultipette?

含25 mLCombitip?（可分配0.5 mL等分的緩沖液1和0.2 mL NADH溶液等分試樣）

5)?時鐘

6)?分光光度計設(shè)置為340nm

7)?渦旋混合器（例如IKA?Yellowline?Test?Tube?Shaker?TTS2）。

8)?恒溫水浴

4．檢測方法?

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波長: 340 nm

比色杯: 1 cm 光路 (玻璃或者塑料) 溫度: ~ 25°C

最終體積: 3.34 mL

樣品溶液: 每個比色皿1.0-50 μg亞硫酸鹽（在0.10-2.00 mL樣品體積中）

空白調(diào) 0：相對于空氣或者水

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移液至3mL比色管?

空白管?

樣品管?

蒸餾水25℃

2.60 mL

2.50 mL

樣品溶液

-

0.10 mL

溶液 1 (緩沖液)

0.50 mL

0.50 mL

溶液 2 (NADH)

0.20 mL

0.20 mL

懸浮液 3 (NADH過氧化物酶)

0.02 mL

0.02 mL

混合*，約4分鐘后讀取溶液（A1）的吸光度，并添加以下物質(zhì)開始反應(yīng)：

懸浮液4（亞硫酸鹽氧化酶）

0.02 mL

0.02 mL

混合*停止反應(yīng)后（約30分鐘）讀取溶液（A2）的吸光度。如果反應(yīng)在30分鐘后仍未停止，則繼續(xù)每隔10分鐘讀取吸光度，直到吸光

度穩(wěn)定或持續(xù)下降超過10分鐘**。

* 例如用塑料刮刀攪拌或用比色皿蓋/封口膠密封后輕輕翻轉(zhuǎn)比色皿

**如果樣本的蠕變速率比空白管大，推斷樣本和空白的吸光度為加入懸浮液4(亞硫酸鹽氧化酶)時的吸光度值。

注意:

由于亞硫酸鹽溶液的特性不穩(wěn)定，樣品制備后應(yīng)盡快進行分析。

5．結(jié)果計算?

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分別對樣品管和空白管兩次測得的吸光度值進行相減(A2-A1)，然后從樣品管的(A2-A1)中減去空白管的(A2-A1)，這樣得到ΔA亞硫酸鹽。按照常規(guī)，ΔA亞硫酸鹽的數(shù)值至少要在0.100個吸光單位才能獲得滿意的試驗結(jié)果。

SO2的含量可以依照下列公式計算：

c ???= ????????V ?× ?MW ??????????x ???ΔA 亞 硫 酸 鹽??????????[g/L] ε × d?×