GV3101(pSoup-19)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品名稱： GV3101(pSoup-19)感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱：
產(chǎn)品編號： MCC0109
產(chǎn)品價(jià)格： null
產(chǎn)品產(chǎn)地： 中國
品牌商標(biāo)： Frdbio
更新時(shí)間： 2023-08-15T17:03:56
使用范圍： 僅供科研使用
- 聯(lián)系人 : 趙經(jīng)理
- 地址 : 光谷國際B座1513
- 郵編 :
- 所在區(qū)域 : 湖北省
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GV3101(pSoup-19)感受態(tài)細(xì)胞
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產(chǎn)品編號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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MCC0109 |
GV3101(pSoup-19)感受態(tài)細(xì)胞 |
100μl*10 |
保存條件：-80℃。
1.? 產(chǎn)品簡介：
基 因 型C58 (rifR) Ti pMP90
(pTiC58DT-DNA) ( gentR)Nopaline(pSoup-p19-tetR)
p19蛋白來源于番茄叢矮病毒，可抑制宿主對外源基因的RNA沉默效應(yīng)，提高異源基因轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性，進(jìn)而促進(jìn)異源蛋白的表達(dá)，廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因植物及煙草葉片，擬南芥葉片，番茄葉片或原生質(zhì)體的瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)中。GV3101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是TDNA插入植物基因組必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。pMP90
(pTiC58DT-DNA)型Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：gent，賦予
GV3101菌株慶大霉素抗性；在GV3101菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒：pSoup-p19即為GV3101(pSoup-p19)菌株，可幫助pGreen，62SK，pGs2等質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制，同時(shí)賦予該菌株四環(huán)素（tet）抗性。適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作。GV3101(pSoup-p19)化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301(卡那霉素抗性)質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>103 cfu/μg DNA。
2.使用說明：
1．取100 μl感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中融化。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，靜置冰浴30min。
3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中靜置2-3min，該過程不要搖動(dòng)離心管。
4．每個(gè)離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養(yǎng)45～60min使菌體復(fù)蘇。
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12~16h。
3.注意事項(xiàng)：
1．感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化，8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2．混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3．轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
*本試劑僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用