基本原理：

本試劑盒利用抗體和R-PE上游離的氨基，采用定向對接偶聯技術將抗體分子與R-PE共價偶聯，本試劑盒采用加長臂方案，使被標記抗體與熒光蛋白之間有一定長度柔性連接臂，避免由于位阻妨礙抗體活性或者熒光蛋白發光效率。

主要特點：

ü??試劑盒組分齊全，操作簡單，只要按照操作步驟進行便可得到高品質R-PE標記抗體；

ü??本試劑盒所配置的R-PE為高純度，高活性熒光蛋白，熒光發光效率更高；

ü??本試劑采用定向偶聯技術，熒光蛋白和抗體都不會發生自連，保證偶聯物的特異性和均一性；

ü??試劑盒所使用的交聯劑增加了延長臂，確保不會因為蛋白質位阻而影響發光效率；

ü??鑒于R-PE的蛋白骨架特性，其抗淬滅能力更強。

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試劑盒已經提供材料：

ü??活化R-PE蛋白? ? 1mg? 可用于標記0.3-0.5mg抗體

ü??標記緩沖液? ? ?30ml

ü??抗體修飾試劑? ? 30ul*1支

ü??30KMWCO超濾管? ?2支

ü??封閉試劑? ? ? 1支（臨用前加DMSO 5ul）

ü??DMSO溶劑? ? ? 200ul*1支

ü??說明書? ? ? ?1份

其他需要自備試劑材料：

2??待標記的生物分子；

2??移液器及吸頭；

2??去離子水。

試劑盒儲存

試劑盒中抗體修飾試劑和封閉試劑放在-20?C，其余組分放在2-8℃可保存6個月以上。

試劑盒操作流程：

1.抗體的修飾

1）取待標記抗體（純度>90%），用標記緩沖液調整濃度到 5mg/ml左右為宜，按照每mg抗體加入2μl?抗體修飾試劑，輕輕混勻，在室溫下避光晃動反應 90分鐘；

2）反應完畢后，將其轉入30KMWCO超濾管，用標記緩沖液超濾3次（每次管芯殘留液體不超過原始液量1/4），得到修飾抗體；

2.活化R-PE蛋白與抗體偶聯

1）用標記緩沖液復溶活化R-PE蛋白，濃度調整為5mg/ml；

2）將修飾抗體與活化R-PE蛋白，按照質量比1:3比例（每mg修飾抗體對應3mg活化R-PE蛋白）混合，室溫避光反應2小時；

3）將封閉試劑管中加入5ul DMSO,；按照每0.5mg抗體5ul比例用量加入步驟2）反應產物中，封閉未反應完的活性基團；

4）標記好的抗體分裝，加入適當保護劑，-20℃保存備用。

注意事項：

1）本試劑盒中抗體修飾試劑和封閉試劑為高活性試劑，請-20℃保存；其余成份2-8℃保存、勿凍存。

2）試劑盒組份在運輸過程中可能造成顛倒，會使液體或干粉試劑粘到管壁或瓶蓋上。使用前請離心處理，以使附著管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底。

3）本試劑盒中活化R-PE蛋白需要避光低溫保存，一旦復溶請一次性使用完；標記過程盡量保證其避光；

4）封閉劑需現用現配，干粉溶解后不能長期保存；

5）使用本試劑盒標記抗體，其抗體特異性要高，純度不低于90%，最好使用單克隆抗體，溶液環境不含游離氨基，最好為PBS溶液；標記前抗體需去除NaN3和BSA，抗體的透析、濃縮和濃度測定等操作都會造成抗體量的損失，因此標記前準備抗體時需根據具體情況考慮最適的抗體量；

6）由于抗體修飾后所帶的基團容易被重新氧化，因此修飾后抗體需盡快與活化的R-PE進行偶聯；

7）本試劑盒中的超濾管為特殊處理的，可有效避免熒光淬滅和蛋白吸附損失，市面超濾管可能會對標記效率造成影響。

8）本試劑盒中部分試劑為高活性試劑，對皮膚和身體有一定的危害，請全程戴手套操作；DMSO屬微毒類，對人體皮膚有滲透性，對眼有刺激作用，使用時避免與皮膚、眼睛和粘膜接觸。