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蛋白質末端測序是解析蛋白質氨基末端（N端）或羧基末端（C端）序列的重要手段，對于理解蛋白質結構、功能及翻譯后修飾具有關鍵意義。蛋白質的末端序列不僅決定其空間折疊和相互作用能力，還反映翻譯后修飾和成熟加工狀態。通過末端測序，科研人員可以鑒定蛋白質切割位點、信號肽去除情況以及修飾類型，為蛋白質功能研究、疾病機制分析及新靶標發現提供精確數據。隨著高分辨質譜與化學標記技術的發展，蛋白質末端測序已經成為蛋白組學研究中不可或缺的技術手段。

一、蛋白質末端測序概述

1、定義與基本原理

• 蛋白質末端測序是確定蛋白質 N 端或 C 端氨基酸序列的方法。
• N 端測序通常利用化學衍生或酶切策略標記氨基末端，再結合質譜或 Edman 降解方法分析。
• C 端測序較少應用，但通過特定化學衍生方法或質譜亦可獲得。

2、主要目的

• 鑒定蛋白質成熟形式，如信號肽去除后的 N 端序列。
• 解析翻譯后修飾，包括乙酰化、甲基化、泛素化等。
• 輔助蛋白質結構預測及功能分析。

3、應用背景

• 在蛋白組學、結構生物學及疾病機制研究中，末端測序可提供精確序列信息。
• 對于肽藥物研發和蛋白質工程，末端測序有助于驗證蛋白質完整性與修飾狀態。

二、蛋白質末端測序方法

1、N 端測序方法

（1）Edman 降解法

• 利用苯異硫氰酸（PITC）逐步標記 N 端氨基酸，并通過色譜或質譜分析釋放的氨基酸序列。
• 優點：高精度、可直接獲得氨基酸序列。
• 局限：對蛋白質量要求高，無法快速分析復雜蛋白混合物。

（2）化學衍生標記法

• 利用親核試劑如 TNBS、Dansyl-Cl 或 TMT/iTRAQ 標簽化 N 端氨基酸。
• 標記后的肽通過質譜分析，可快速獲取 N 端序列信息。
• 優點：適用于復雜蛋白混合物，兼容高通量質譜。

（3）酶切策略

• 特異性蛋白酶（如 Glu-C、Trypsin）切割蛋白質后，保留 N 端肽進行標記和質譜分析。
• 可結合化學標記增強信號檢測，適合低豐度蛋白。

2、C 端測序方法

（1）化學衍生法

• 利用羧基末端特異性化學試劑標記 C 端。
• 常用方法包括 C 端酯化、胺化或固相捕獲。

（2）質譜分析

• C 端標記肽通過高分辨質譜檢測，結合數據庫搜索鑒定氨基酸序列。
• 可結合酶切策略提高覆蓋率。

三、蛋白質末端測序的關鍵技術點

1、蛋白質純化與樣品制備

• 高純度樣品可減少背景噪聲，提高末端測序精度。
• 常用方法包括 SDS-PAGE 分離、凝膠回收或親和富集。

2、標記策略選擇

• 根據實驗目的選擇 N 端或 C 端特異性標記。
• 對于復雜蛋白混合物，高通量標記結合質譜最為有效。

3、質譜分析與數據處理

• 高分辨質譜（Orbitrap、Q-Exactive）可精確定量和鑒定末端肽。
• 數據分析結合蛋白質數據庫搜索、修飾識別及序列比對，確保測序準確性。

4、翻譯后修飾分析

• 末端測序同時可揭示 N 端乙酰化、甲基化、泛素化等修飾信息。
• 對研究蛋白質活性調控及信號轉導機制具有重要意義。

四、蛋白質末端測序的科研與應用價值

1、基礎研究

• 確定蛋白質成熟加工形式和信號肽切割位點。
• 分析蛋白質的翻譯后修飾，為功能研究提供基礎數據。

2、疾病機制研究

• 末端異常修飾可作為疾病標志物，如癌癥或代謝疾病相關蛋白。
• 精確測序有助于發現新的治療靶點。

3、藥物與蛋白質工程

• 驗證重組蛋白或肽藥物的序列完整性和修飾狀態。
• 提供蛋白質結構優化和活性調控依據。

4、技術整合與高通量分析

• 現代質譜結合化學標記實現高通量末端測序，適合蛋白組學研究。
• 數據庫與生物信息學工具可解析大量蛋白末端信息，建立蛋白質功能與修飾全景圖。

蛋白質末端測序通過精確解析 N 端和 C 端序列，為理解蛋白質成熟、翻譯后修飾及功能提供重要信息。該技術在基礎研究、疾病機制分析、蛋白質工程及藥物研發中均具有廣泛應用價值。現代高分辨質譜結合化學標記與酶切策略，使末端測序能夠處理復雜蛋白混合物并實現高通量分析。借助百泰派克生物科技的專業平臺，科研人員可以獲得高覆蓋、高精度的蛋白質末端序列數據，為蛋白質功能研究和新靶標發現提供強有力的技術支持。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對蛋白質序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對蛋白質的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質，提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白質組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種蛋白質標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.專業生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，最后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術先進，填補技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從最小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等專業服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，專業提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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