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服務(wù)介紹：　　 組織芯片的免疫熒光檢測(cè)，是將許多不同個(gè)體組織標(biāo)本以規(guī)則微陣列方式排布于同一載玻片上，同時(shí)進(jìn)行相同指標(biāo)的免疫熒光檢測(cè)。組織芯片熒光三標(biāo)實(shí)驗(yàn)室在同一張組織芯片上對(duì)三個(gè)抗原進(jìn)行同時(shí)標(biāo)記，從而實(shí)現(xiàn)定性，定位，半定量分析。 組織芯片的免疫熒光檢測(cè)，標(biāo)本體積小, 標(biāo)本信息含量大 , 一次性實(shí)驗(yàn)即可獲大量結(jié)果。實(shí)驗(yàn)條件更易控制一致，減少批間批內(nèi)誤差，結(jié)果更準(zhǔn)確。 實(shí)驗(yàn)流程： 1石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入環(huán)保型脫蠟液I 10min-環(huán)保型脫蠟液II 10min-環(huán)保型脫蠟液III 10min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-無(wú)水乙醇Ⅲ5min-95%乙醇5min-85%乙醇5min-75%乙醇5min-蒸餾水洗。 2 抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液（PH6.0）的修復(fù)盒中于高壓鍋內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。噴氣計(jì)時(shí)2min30s，自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。(修復(fù)液和修復(fù)條件根據(jù)組織來(lái)確定） 3 畫圈, 雙氧水封閉：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），切片放入3%雙氧水溶液，室溫避光孵育25 min，封閉內(nèi)源性的過(guò)氧化物酶，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min 4 血清封閉: 切片稍甩干，滴加BSA，封閉30min。（一抗是山羊來(lái)源用10%兔血清封閉，一抗其它來(lái)源的用3%BSA封閉） 5 加第一種一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)） 6 加對(duì)應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。 7 加CY3-TSA：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加CY3-TSA，避光室溫孵育10min. 孵育完后，玻片置于TBST中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min 8 高壓修復(fù)：組織切片置于盛滿檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液（PH6.0）的修復(fù)盒中于高壓鍋內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，噴氣計(jì)時(shí)2min30s，自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。 9 加第二種一抗：在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)） 10 加對(duì)應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。 11 加FITC-TSA：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加TSA，避光室溫孵育10min. 孵育完后，玻片置于TBST中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min 12 高壓修復(fù)：組織切片置于盛滿檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液（PH6.0）的修復(fù)盒中于高壓鍋內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，噴氣計(jì)時(shí)2min30s，自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min，去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片 13 加第三種一抗：在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)） 14 加CY5標(biāo)記的熒光二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的CY5標(biāo)記熒光二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。孵育完后，玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。 15 DAPI復(fù)染細(xì)胞核：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。 16 淬滅組織自發(fā)熒光：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。在圈內(nèi)加入自發(fā)熒光淬滅劑5min，流水沖洗10min。 17 封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。 18 切片置于掃描儀下采集圖像:DAPI紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm，發(fā)射波長(zhǎng)420nm，發(fā)藍(lán)光；FITC激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm，發(fā)射波長(zhǎng)515-555 nm，發(fā)綠光；CY3激發(fā)波長(zhǎng)510-560，發(fā)射波長(zhǎng)590nm，發(fā)紅光.。CY5激發(fā)波長(zhǎng) 608-648nm, 發(fā)射波長(zhǎng)672-712,，CY5原本為正紅色，為了與CY3區(qū)分開，我們?cè)O(shè)定為粉色光。