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總RNA提取技術服務

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產品名稱: 總RNA提取技術服務

英文名稱: 總RNA提取技術服務

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更新時間: 2023-07-31T09:56:51

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?實驗介紹?
TRIZOL試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯仿時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
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總RNA提取(Trizol提?。嶒灢襟E
在收集到生物材料之后,最好能即刻進行RNA 制備工作。若需暫時儲存,則應以液氮將生物材料急速冷凍后,儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA 時,將存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細胞,不可以先行解凍,以避免RNase的作用。
1. 提取組織RNA 時,每50~100mg 組織用1ml Trizol試劑對組織進行裂解;提取細胞RNA 時,先離心沉淀細胞,每5-10╳106 個細胞加1ml Trizol后,反復用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細胞;
?2. 將上述組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP 管中,在室溫15~30C下放置5 分鐘;
?3. 在上述EP 管中,按照每1ml TRIZOL 加0.2ml 氯仿的量加入氯仿,蓋上EP管蓋子,在手中用力震蕩15秒,在室溫下(15℃~30℃)放置2~3 分鐘后,12000g(2℃~8℃)離心15 分鐘;
?4. 取上層水相置于新EP 管中,按照每1ml TRIZOL 加0.5ml 異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(15℃~30℃)放置10分鐘,12000g(2℃~8℃)離心10 分鐘;
?5. 棄上清,按照每1ml TRIZOL 加1ml 75%乙醇進行洗滌,渦旋混合,7500g(2℃~8℃)離心5 分鐘,棄上清;
?6. 讓沉淀的RNA 在室溫下自然干燥;
7.用Rnase-free water 溶解RNA 沉淀。


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