質(zhì)粒小量提取試劑盒II(100preps)
產(chǎn)品名稱： 質(zhì)粒小量提取試劑盒II(100preps)
英文名稱： Plasmid mini kit II
產(chǎn)品編號(hào)： PD1213-02
產(chǎn)品價(jià)格： 0
產(chǎn)品產(chǎn)地： 美國(guó)圣地亞哥
品牌商標(biāo)： Biomiga
更新時(shí)間： null
使用范圍： null
Biomiga（中國(guó)）
- 聯(lián)系人 :
- 地址 : 上海市閔行區(qū)吳河路328號(hào)A棟2樓
- 郵編 : 201109
- 所在區(qū)域 : 上海
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- 傳真 : 點(diǎn)擊查看
- 郵箱 : tech@biomiga.com.cn
試劑盒組分：
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Catalog# |
PD1213-02 |
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Preps |
250 |
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ezBind Columns |
250 |
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Buffer A1 |
125 mL |
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Buffer B1 |
125 mL |
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Buffer N1 |
135 mL |
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Buffer KB |
135 mL |
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DNA Wash Buffer* |
3 x 24 mL |
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Elution Buffer |
60 mL |
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RNase A (20 mg/mL) |
12.5 mg
(625 μL) |
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User Manual |
1 |
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保存條件：
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RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。
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注意事項(xiàng)：
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- 使用前請(qǐng)將適量乙醇加入DNA Wash Buffer，令乙醇終濃度為80%
- 純化中低拷貝的質(zhì)粒時(shí)，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同體積的Wash Buffer和Elution Buffer
- 若為-70oC甘油凍存的菌，請(qǐng)先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng)。
- 若用于提取1-4 mL的菌落，請(qǐng)將Buffer A1, B1, N1的量降低至250 μL, 250 μL 及 350 μL，DNA wash Buffer及Elution Buffer的量不變。
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操作步驟：
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- 接種新鮮的單個(gè)菌落到5-12 mL的LB培養(yǎng)基（含適量抗生素），37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)（勿超過(guò)16小時(shí)）。室溫下10,000 rpm離心1分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入450 μL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩充分懸浮細(xì)菌細(xì)胞。
- 加入 450 μL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)多次至溶液充分混勻，室溫靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
- 加入550 μL Buffer N1, 立即反轉(zhuǎn)多次，至溶液充分混勻，此時(shí)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
- 將離心管轉(zhuǎn)至高速離心機(jī)，在室溫下13,000 rpm離心10分鐘（若上清中有白色沉淀，可再次離心）。
- 小心吸取700 μL離心后的上清液至帶有收集管的DNA柱中（避免吸起沉淀），室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“7”至全部上清離心過(guò)DNA柱。
- 可選: 向DNA柱中加入 500 μL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
- 向離心柱中加入650 μL DNA Wash Buffer（確保已加入無(wú)水乙醇），室溫下，13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“8”。
- 將離心柱放回高速離心機(jī)中，13,000 rpm室溫下開(kāi)蓋離心2分鐘，以徹底去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉(zhuǎn)至一個(gè)新的1.5 mL離心管中，向DNA柱的正中間加入100~150 μL（體積>100 μL）的ddH2O（pH在7.0-8.5之間）或Elution Buffer，室溫放置2分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質(zhì)粒DNA。將洗脫液再加到柱的中間，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質(zhì)粒DNA。
操作流程：
