E.coli Top10感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌Top10感受態細胞菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。常規實驗室克隆比DH5α快，轉化效率高，可用于藍白斑篩選。

基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galUgalK rpsL (StrR) endA1 nupG

特點：1.TOP10菌株來源于MC1061菌株，是目前實驗室最常用的感受態細胞之一，基因型與DH10B高度類似（DH10B?為?galE15?型，而?TOP10?為?galU?型）。2.?生長速度快（比?DH5α快，但比?Mach1-T1?生長速度慢），10?小時可見克隆3. recA1和endA1的突變,有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。3.存在lacIqZΔM15基因使此菌株可以進行藍白斑篩選?？捎糜跇嫿寺?，藍白斑篩選等實驗，具鏈霉素抗性。pUC19質粒檢測，轉化效率可達108?cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．?取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。
3．?42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。
4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。
5．?根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1.?剛化凍的細胞轉化效率最高，避免反復化凍。

2.?整個動作要輕柔。

*本試劑僅供實驗室研究使用

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