人糖鏈抗原19-9(CA19-9) 酶標試劑盒
產品名稱： 人糖鏈抗原19-9(CA19-9) 酶標試劑盒
英文名稱： Human CA19-9 ELISA Kit
產品編號： L5E1005
產品價格： 0
產品產地： China
品牌商標： Linc-Bio Science
更新時間： null
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糖鏈抗原19-9（CA19-9）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
產品貨號：L5E1005??????????????????????????????????????????
預期應用
ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中糖鏈抗原19-9（CA19-9）的濃度，適用于胰腺，肝膽和胃癌患者的早期診斷，治療的監測和監測癌癥的復發。
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概述
CA 19-9是SW-1116人結腸癌抗原在小鼠中制成的單克隆抗體19-9所識別的抗原，已證明其結構為唾液酸化的I型乳糖系巖藻五糖，共由6個糖基組成，也即唾液酸化的Lewis a抗原。人血清CA 19-9的上限為37000U/L（國外）或30000 U/L（國內），消化系統癌腫患者血清CA 19-9明顯增高，如胰腺癌，肝膽系癌，胃癌和結腸癌分別可為正常均值（9400U/L）的683，535，279和115倍，陽性率分別為72.1%,66.7%，61.9%和19.0%，以胰腺癌為最高，故CA 19-9被認為是對胰腺癌較好的標志。消化系統以外的惡性腫瘤和良性疾患血清CA 19-9分別僅6.0%和1.3%（國外）超過上限，國內分別為16.7%和10%。CA 19-9診斷胰腺癌的靈敏度，特異性和PV（+）分別為69%~89%，75%~88%和54%~75%。其中對胰腺癌和肝膽系癌的陽性率均高于癌胚抗原CEA，對結直腸癌的陽性率均低于CEA，對胰腺癌的特異性也和CEA相仿或略高。約有5%~9%的胰腺炎患者，血清CA 19-9也有中等度的升高，一般不超過100000 u/L。有報導，僅約1/3的I期胰腺癌病人才見血清CA 19-9上升，故CA 19-9在胰腺癌早期診斷中的價值尚未肯定，但作為預后和病情追蹤的指標則意見一致。胰腺癌手術后CA 19-9迅速降低，若重新上升往往是腫瘤復發的先兆。CA199臨床臨界值為37U/ml。
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實驗原理
用純化的CA 19-9抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗CA 19-9抗體的微孔中依次加入標本或標準品、HRP標記的抗CA 19-9抗體，經徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和標本中的CA 19-9含量呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測量吸光度（OD值），計算標本濃度。
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試劑盒組成及試劑配制
1.????????? 酶聯板：一塊（96孔）
2.????????? 標準品：6瓶，0.5ml/瓶。CA 19-9濃度分別為0 U/ml，10 U/ml，30 U/ml，100U/ml，200 U/ml，400 U/ml。
3.????????? 質控品：2瓶，0.5ml/瓶。CA19-9濃度分別為20-40 U/ml和160-240 U/ml。
4.????????? HRP標記的抗CA19-9抗體：1×10ml/瓶。
5.????????? TMB顯色液：1×10ml/瓶。
6.????????? 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋20倍。
7.????????? 終止液：1×5ml/瓶（2N H2SO4）。
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標本的采集及保存
1.????????? 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于5000 x g離心5分鐘，取上清即可檢測。。
2.????????? 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 5000 x g離心5分鐘。
3.????????? 細胞培養物上清或其它生物標本：請5000 x g離心5分鐘，取上清即可檢測。
注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過3個月，-80℃不應超過6個月；但皆應避免反復凍融。高血脂的標本不需進行特殊處理，可直接檢測。，
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操作步驟
1.????????? 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液40ul，余孔分別加標準品或待測樣品40ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應45mins。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.????????? 棄去液體，洗滌五次，拍干。每孔加HRP標記的抗CA 19-9抗體工作液100ul，37℃,45mins。
3.????????? 溫育后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，拍干。
4.????????? 每孔加顯色工作液100ul，室溫避光顯色，5分鐘。
5.????????? 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
6.????????? 用酶聯儀在405nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后立即進行檢測。
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注意事項：
1.????????? 每次實驗留一孔作為空白調零孔（不同于空白孔），該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液即顯色液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。
2.????????? 一次加樣最好控制在5分鐘內，如標本量多，推薦使用多道移液器加樣。注意在吸取標本/標準品，酶結合物或底物時，第一孔與最后一孔加樣時間間隔若太大，會導致不同的 “預孵育”時間，從而影響測量值的準確性及重復性。
3.????????? 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請最后乘以稀釋倍數。
4.????????? 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫。使用后立即冷藏保存。
5.????????? 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。在加入HRP標記抗體溶液或底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中以防讓微孔干燥掉。為防止樣品蒸發，酶標板加上蓋或覆膜，洗板拍干后請立即加入后步試劑。
6.????????? 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
7.????????? 請每次測定的同時做標準曲線，建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
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洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
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特異性：本試劑盒可同時檢測重組或天然的糖鏈抗原19-9（CA19-9）。
檢測范圍：10.0U/ml – 400U/ml
最低檢測限：5.0U/ml
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計算
??以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線（推薦使用專業制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3），根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
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說明
1.????????? 只有全部使用LINC-BIO試劑才能保證檢測效果，因為所有試劑都是有關聯的，不能混用其他制造商的產品。
2.????????? 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發和污染，避免污染。
3.????????? 試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時，僅適用于部分試劑，具體見標簽）；2-8℃（頻繁使用時）。
4.????????? 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5.????????? 剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。
6.????????? 本試劑盒有效期：6個月。
特別說明:本試劑盒僅供科學研究用.