產品介紹：

2019年底，嚴重急性呼吸系統綜合癥冠狀病毒2（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）開始肆虐全球，對全人類生命健康造成巨大威脅。該病毒通過刺突蛋白（Spike protein,S）受體結合域（Receptor Binding Domain,RBD）識別細胞表面受體-血管緊張素轉化酶?2（Angiotensin I Converting Enzyme 2,ACE2）并與其結合，在相關蛋白協助和介導下侵染細胞。

本試劑盒可檢測的中和抗體為針對新冠病毒(Omicron)S蛋白并且可以阻斷其與ACE2結合的抗體；本試劑盒可以檢測任何物種體液中針對S蛋白的中和抗體。

本試劑盒預包被酶標板上Frdbio采用共價固定手段S蛋白RBD片段，其可以與HRP-ACE2偶聯物特異性結合，然后通過TMB在HRP-ACE2的HRP酶催化下顯色；如果待檢測樣本或者標準品中含有針對S蛋白中和抗體會阻HRP-ACE2偶聯物與固定的RBD片段的結合，因此中和抗體含量與TMB顯色值呈負相關。

Frdbio研發的新冠病毒(Omicron)S蛋白中和抗體檢測試劑盒可檢測血清、血漿或其他體液中針對S蛋白的中和抗體，不受待檢樣品種屬和抗體亞型的限制。

為方便行文，以下文中所提到的S蛋白皆為新冠病毒（Omicron）S蛋白

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試劑盒組成：

儲存方法：

請按各個組分對應的溫度存儲，該試劑盒在各組分未拆封的情況下，自生產之日起可存放6個月以上。

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試劑準備:

1.從冰箱中取出所有試劑，在使用前平衡至室溫（20℃至?25℃）。 未用完后的所有試劑保存在冰箱中。

2.使用前應將所有樣品和對照品進行離心。

3.HRP-ACE2工作液：將?HRP-ACE2偶聯復合物（100×）用??通用稀釋液按?1：100進行稀釋，即為HRP-ACE2工作液；

4.洗滌液：將?濃縮洗滌液（25×）用?ddH2O?以體積比?1:24?進行稀釋（稀釋25倍），即為洗滌液。

Frdbio提示：如濃縮洗滌液（25×）中有沉淀，請在水?。ㄗ罡?50℃）中溫育、混合至沉淀溶解。

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待測樣品和陰陽性對照品準備：

1.將陽性對照品和陰性對照品用?通用稀釋液?以體積比 1:99 進行稀釋，即稀釋100倍。

例如，5μL 樣品加入495μL?通用稀釋液。

2.將待測樣品用通用稀釋液以體積比 1:9 進行稀釋，即稀釋10倍。

例如，10μL 測試樣品加入90μL?通用稀釋液。?

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預包被酶標板準備及加樣設計

1.陽性對照品和陰性對照品做兩個平行重復孔，有條件的可以做三孔平行重復。

2.根據待測樣品的數量摳取所需酶標板孔條（有條件的可以考慮樣品做三次平行重復）。 確保板孔條牢固地卡入板框，未使用的板孔條及時裝入有干燥劑鋁箔袋密封-20℃保存。

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檢測操作步驟

1、將稀釋好的陰性對照品、陽性對照和待測樣品，分別加入酶標板孔，每孔50ul；

2.以上每孔中再立即加入HRP-ACE2工作液，每孔50ul,加完后震蕩儀輕輕混勻；

3.用酶標板覆膜封蓋板孔，在 37℃ 下孵育 60 分鐘；

4.取下酶標板覆膜，用 350μL 的?洗滌液?洗滌酶標板孔3次；

5.洗滌完畢后在吸水紙上拍干孔內液體；

6.每孔立即加入100uL?TMB底物液，室溫顯色10-15分鐘，待其顯色穩定后立即在每孔加入50uL底物反應終止液

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吸光值讀取

提前10分鐘打開酶標儀，讓其穩定

將顯色反應終止的酶標板放入酶標儀，設定好檢測波長450nm(最好設置雙波長：設置450nm吸光波長，630nm為參考波長)；

Frdbio提示：TMB底物反應時間與溫度有關，比較適宜溫度為25℃左右；溫度太低，反應速度慢，溫度高，背景較深，邊緣效應嚴重。

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試劑盒實驗數據有效性判定：

陰性對照孔 ?????OD450（或OD450/OD630）>0.900

陽性對照孔???? ?OD450（或OD450/OD630）<0.300

本試劑盒典型數據：

陰性對照孔 ?????OD450（或OD450/OD630）=1.966

陽性對照孔????? OD450（或OD450/OD630）=0.102

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待檢測樣品中中和抗體檢測判定方法：

用抑制率來判定樣本中抗SARS-CoV-2中和抗體的水平，公式如下：

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??×100%

判定所參照的標準：

抑制率≥20% 判斷結果為陽性 說明檢出SARS-CoV-2中和抗體